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电化发光测定原理
电化学发光免疫测定
电化学发光免疫测定
电化学发光反应:电化学发光(electro-chemiluminescence,ECL)是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应,实际上包括了电化学和化学发光两个过程。化学发光剂三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+(图1)和电子供体三丙胺(TPA)在阳电极表面同时各失去一个电子发生氧化反应(图2)。二价的[Ru(bpy)3]2+被氧化成三价,后者是一种强氧化剂。TPA被氧化成阳离子自由基TPA+*(参见图2),后者很不稳定,自发地失去一个质子(H+),形成自由基TPA*,这是一种非常强的还原剂。这两个高反应基团在电极表面迅速反应,三价的[Ru(bpy)3]3+被还原形成激发态的二价[Ru(bpy)3]2+*,能量来源于[Ru(bpy)3]3+和TPA*之间存在的高电化学电位差。TPA*自身被氧化成二丙胺和丙醛。接着激发态的((([Ru(bpy)3]2+*衰减成基态的[Ru(bpy)3]2+,同时发射一个波长620nm的光子。这一过程在电极表面周而复始地进行,产生许多光子,使光信号得以增强。
图1 三联吡啶钌NHS
Ru2+*
-H+ 光子
TPA* Ru3+ Ru2+
TPA+*
TPA
+ -e -e +
图2 在电极表面的ECL反应
Ru2+: [ Ru(bpy)3] 2+ 基态
Ru3+: [Ru(bpy)3]3+ 氧化态
Ru2+*: [Ru(bpy)3]2+* 激发态
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