医学实验室认可技术要求的关键控制点pcr专业.pptVIP

5.6 检验程序的质量保证 一般核酸提取试剂促使靶核酸从细胞内释出的原理 核酸的分离纯化 靶核酸提取的质量 临床标本及核酸提取中可能存在的抑制和干扰物质 核酸样本制备及扩增检测的质控 产物检测的质控 核酸样本的制备、扩增检测及其质量控制 5.6 检验程序的质量保证 一般核酸提取试剂促使靶核酸从细胞内释出的原理 靶核酸可以与宿主细胞整合，核内游离及胞浆内各种构形存在于细胞内，如测定的是病原微生物,则靶核酸存在于细菌、病毒、原虫或真菌细胞内，如果上述细胞破裂,则靶核酸亦可存在于细胞外。 一般均使用去垢剂(如Triton-100)裂解细胞，用一种蛋白裂解酶(如蛋白酶K)消化结合于核酸的蛋白质，从而将靶核酸从细胞内释放出来。 5.6 检验程序的质量保证 核酸的分离纯化 核酸的分离纯化就是要将蛋白、脂类等干扰核酸扩增的物质去除。 经典方法 硅吸附法 对于商品核酸提取试剂盒，临床实验室在使用前，必须对其核酸提取纯度和效率进行评价。 5.6 检验程序的质量保证 靶核酸提取的质量 纯化的靶核酸的完整性：可使用凝胶电泳将样本的核酸提取物与一核酸标准比较测定。 核酸提取的产率：可在A260读数测定。 核酸纯度：可通过提取物A260/A280比率判定 血清或血浆中病原体核酸纯化纯度：采用一种间接的方法，即使用已知病原体含量的溶血和/或脂血标本用待评价试剂提取，然后进行扩增检测，比较所得到