人粒细胞无形体病室检测方案.docVIP

人粒细胞无形体病实验室检测方案（试行） 表1巢式PCR检测无形体及埃立克体16S rRNA基因常用引物引物名称 序 列 片段(bp) Eh-out1(AF414399) 5’-TTG AGA GTT TGA TCC TGG CTC AGA ACG-3’ 653 Eh-out2(AF414399) 5’-CAC CTC TAC ACT AGG AAT TCC GCT ATC-3’ Eh-gs1(AF414399) 5’-GTA ATA CT GTA TAA TCC CTG-3’ 282 Eh-gs2(AF414399) 5’-GTA CCG TCA TTA TCT TCC CTA-3’ HGA1 5’-GTC GAA CGG ATT ATT CTT TAT AGC TTG -3’ 389 HGA2 5’-TAT AGG TAC CGT CAT TAT CTT CCC TAC-3’ PCR反应混合物的准备按常规进行。第一轮反应采用外引物对Eh-out1和Eh-out2，DNA模板10μl（白细胞提取的DNA可适当减少）。PCR反应体系总体积为25μl或50μl（需要进行PCR测序或克隆时，应适当扩大反应体系），其它成分的浓度按常规进行。反应程序如下： 94℃ 5min 40循环：94℃ 45sec 55℃ 50sec 72