神经生物学研究技术与方法.ppt

神经生物学研究技术与方法 电生理技术 行为学 脑功能成像技术 脑立体定位仪又称脑固定装置(stereotaxic apparatus), 它是利用颅骨外面的标志或其它参考点所规定的三度坐标系统,来确定皮层下某些神经结构的位置,以便在非直视暴露下对其进行定向的刺激、破坏、注射药物、引导电位等研究。 动物脑立体定位仪是神经解剖、神经生理、神经药理和神经外科等领域内的重要研究设备，用于对神经结构进行定向的注射、刺激、破坏、引导电位等操作，可用于帕金森氏病动物模型建立，癫痫动物模型建立，脑内肿瘤模型建立，学习记忆，脑内神经干细胞移植，脑缺血等研究。 1 脑的立体定位技术stereotaxic technique of brain 定位原理 定位图谱 海马 Dual Manipulator Stereotaxic Frame with 18° or 45° Ear Bars ■ 此儀器為神經解剖、神經生理、神經外科等領域的重要研究設備，WPI的立體定位儀可以提供準確、穩定的定位程序，適用於大多數小型動物的實驗 Stereotaxic Frame  (a) After a mouse is mounted on a stereotaxic frame and its skull is exposed, the bregma is localized (arrowhead). Antero-posterior (AP) axis is indicated on left. (b) The needle tip is moved onto the bregma (arrowhead). (c) The tip is moved posteriorly and laterally to an appropriate stereotaxic coordinate. The position of the tip (arrow) is marked by a marker pen. (d) A small hole (arrow) is made in the skull by using an electric drill. (e) The needle is brought down to an appropriate coordinate through the hole (arrow). Digital Stereotaxic Frame with 18° or 45°Ear Bars 数位 定位仪 ?Mouse and Neonatal Rat Adaptor ■ 針對小鼠及幼大鼠頭部構造，提供無創且穩定的固定方式 1、根据体重腹腔注射麻醉药 待麻醉后固定在定位仪上 用双氧水擦除脑膜，直至露出前囟和后囟并标记。 找出需要定位的点，电转打孔。 进针给药缝合 2 单细胞记录技术 Single-unit recording 胞外动作电位是指通过微电极在细胞外记录到的单细胞动作电位，可以使用玻璃或金属微电极 If the electrode is a microelectrode, with a tip size of 3 to 10 micrometres, the electrode will often isolate the activity of a single neuron 记录电极 电极材料：钨、铂铱合金、不锈钢等 尖端形状：尖端钝圆、尖端锐利（角度） 绝缘物质和绝缘方法：Epoxy、Glass 记录电阻(测量频率1000Hz)：500k?2M 电极尾端 电极个数：单电极、多电极 microelectrode 玻璃微电极 麻醉状态下记录实验方法 麻醉状态下记录 清醒状态下单细胞记录装置 学习和记忆的行为学研究 1 经典的条件反射和操作式条件反射 2 迷宫学习模型 学习和记忆的行为学研究 3 一次性被动回避 小鸡一次性厌恶回避反应 学习和记忆的行为学研究 延迟性与样本不匹配操作任务（delayed nonmatching to sample task)。 正确的百分率和延迟的时间可作为这一任务的成绩指标。 其它方法 神 经 生 物 学 常 用 形 态 学 研 究 方 法- 免疫组化、各种神经元染色法，原为杂交等 神经细胞培养方法等 Morris water maze 水迷宫 Eight-arm maze 八臂迷宫 Y迷宫 Y maze 跳台实验 避暗法-达标训练 (Passive avoidance response, trials to criterion) * * bregma 大鼠颅骨表面 微量注射器 电动颅骨钻 单电极尖端 多电极阵列 Plexon放大器