大菱鲜表皮蛋白质组双向电泳技术的建立及优化-渔业科学进展.PDFVIP

第 32卷 第 2期 渔 业 科 学 进 展 VolI32，No．2 2011年 4月 PROGRESS IN FISHERY SCIENCES Apr．，2011 大菱鲆表皮蛋 白质组双 向电泳技术的建立及优化 薛宝贵 黄智慧 周 洲 马爱军 (农业部海洋渔业 资源可持续利用重点开放实验室 青岛市海水鱼类种子工程与生物技术重点实验室 中 国水产科学研 究院黄海水产研究所 ，266071) (上海海洋大学水产与生命学 院，201306) 摘 要 通过对表皮蛋白质提取方法 、不同裂解液配方、等点聚焦程序和上样量等条件的对比试 验，建立及优化 了大菱鲆表 皮组织蛋 白质 的双 向电泳体 系。试验采用改 良的TCA／丙酮和超 声波提 取相结合的方法提取大菱鲆表皮组织的全蛋 白，裂解液配方根据 BioRad公司推荐的进行调整，使 用 17cm pH 4～7的IPG胶条被动水化上样 ，上样量为 250 g。等点聚焦程序采用 3OV线性 6h、250 V 线性 2．5h、500V 线性 1．5h、1000V 快速 2h、4000V 线性 3h、8000V 快速 3h、8000V 线性 1h、500V 24h，凝胶银 染后 用 ImageMaster2D Platinum 7．0软件进行分析 ，最终得到较 满意的双 向电泳图谱 ，具有较高的分辨率和重复性 ，为大菱鲆蛋 白质组学的进一步研究奠定 了基础 。 关键词 大菱鲆 表皮组织 蛋 白质 双向电泳 中图分类号 Q953；$965．399 文献识别码 A 文章编号2011)02—0041一O7 Establishmentandoptim ization oftwo—dimensionalgelelectr0ph0resis forepidermalproteomeofturbotScophthalmusmaximus XUEBao—gui， HUANG Zhi—hui， ZHOU Zhou MAAi—jun (KeyLaboratoryforSustainableUtilizationofMarineFisheriesResources，QingdaoKeyI．aborat。ryforMarine FishBreedingandBiotechnology，Yellow SeaFisheriesResearch Institute，ChineseAcadem yofFisherySciences。266071) (。CollegeofFisheriesandLifeScience，ShanghaiOceanUniversity．201306) ABSTRACT Thetwo—dimensionalgelelectrophoresisfortheepidermalproteomeofScoph thalmusmaximuswasestablished and optimized through comparative testsbyusing different extractionmethods，isoelectricfocusingprogramsand samplevolumes ． Thetotalproteinsof theturbotepidermiswereextractedbythecombinationofimprovedtrichloroaceticacid(TCA)／ acetoneandultrasonicextractions．The1ysisbufferbasedontheBio—RadrecommendationsWas optimized．Proteinof250