小鼠LEAP2在毕赤酵母中的表达及其活性鉴定.pdfVIP

摘要 arItimicrobjal 目的克隆小鼠肝表达抗菌肽一2(Liver．expressed 码区的cDNA序列并进行序列测定，构建真核表达载体并在毕赤酵母GSll5中表达，初 步分析表达产物的活性。 组克隆载体pucm-T-P和pucm-T_M，转化进E．∞zfBL21，通过菌落PcR筛选，选择 I、＆oR pPIC9-M，通过菌落PcR筛选及限制性内切酶姗oI鉴定，筛选阳性重组子；将 性培养基和PcR技术筛选获得阳性克隆；阳性菌落用甲醇诱导表达，前肽和成熟肽获得 分泌表达，检测表达产物的抗菌活性。 熟肽具有一定的抑菌活性，其表达和活性受多种因素影响。 结论mLEAP一2基因的前肽和成熟肽在酵母中得到分泌表达；成熟肽具有一定的抑菌 活性：成熟肽在pH6、甲醇量O．5％～1％、接种后30h再诱导时表达量最大，而成熟肽的 抑菌活性与其含量有关，成熟肽具有一定的热和酸稳定性，碱稳定性略差。 关键词：肝表达抗菌肽-2：巴斯德毕赤酵母；氯化锂；表达；抗菌活性 II ABSTRACT Aim：T0clone柚d ami sequence aIltibactcrial gene LiVer-expressed p印tide一2(LEAP一2) fbmMouseLiVer，to to express“in尸i拍妇p砸for括GSll5，atldassayactiv时of“sexpressive pmduct． Methods：ThetotalRNAwasextra曲甜fbm MouseLiver，mLEAP一2cDNA、Ⅳas gene obtainedreverse chain then oft11e by traIls嘶ption polymerasereaction(期：PCR)，aIldgene andma坩e ofLEAP一2 andclonedinto vectort0 Pmdomain peptide was锄plified pUCm．T cons仃uctrecombinant and weretransfo衄edimo pUCm—T_PpUCm—T-M．Theproducts n锄sfonnalltⅥ砸jden蛐ed E∞城BL21)．nepositiVe by PCR，and也en bact翻姗-speci行c w踮clonedint0 Sequcnced．mLEAP一2 vector，toconsmlct geIlc pPIC9，阻yeastexperssiIlg recombiIlantand were扛ansformcdinto pPIC9一ppPIC9一M．Thcproducts