a和b地中海贫血的遗传筛查和产前诊断ppt课件.ppt

* Transcription RNA splicing Initiator codon Frameshift Nonsense codon Double heterozygote 中国南方β地贫突变的变异类型和位置 EXON 1 IVS 1 EXON 2 EXON 3 IVS 2 * ? Fragment size: A = 453 bp B = 364 bp C = 423 bp ? One set of PCR conditions DHPLC 分析人β珠蛋白基因: 三个PCR片段扩增 IVS1 5’ UTR 1 2 3 IVS2 3’ UTR A B C * DHPLC的三种 操作模式 ? 非变性分析（ 50 ?C ） 双链DNA大小测定 ? 半变性分析（ 52-78 ?C ） 突变鉴定 ? 全变性分析（ 78-80 ?C ） Oligo和RNA分析 * PCR产物的半变性分析（ 52-78 ?C ） Wild type Mutant Heteroduplexes Homoduplexes Reference Samples PCR Products * * DHPLC 检测β地贫突变的结果 CD2/N -29/N CD2/CD14-15 CD17/N CD2/CD27-28 -28/CD27-28/CD2/-98 CD26/N CD27-28/N -73/N -73/N -28/N Fragment A * CD71-72/IVS-Ⅱ-16 N/N CD41-42/IVS-Ⅱ-16 CD71-72/N IVS-Ⅱ-16/N CD41-42/N ？ CD38/N CD71-72/N CD41-42/CD41-42 Fragment B DHPLC 检测β地贫突变的结果 * N/N IVS-Ⅱ-654/N IVS-Ⅱ-654/654 IVS-Ⅱ-666/N IVS-Ⅱ-654/666 Fragment C DHPLC 检测β地贫突变的结果 * RDB analysis: application to rapid prenatal diagnosis for eight βthalassaemia mutations. Genotype Father CDs41-42 (?CTTT) / N Mother IVS-2-654 (C?T) / N Fetus CDs41-42 / IVS-2-654 Normal control N / N * 诊断结果 基因型 例数 正常 ? 30 杂合子 (total) 35 CDs 41-42 (?TCTT) / N 14 IVS-2-654 (CT) / N 8 -28 (AG) / N 5 CD17 (AT) / N 3 CD26 (GA) / N 2 -29 (AG) / N 1 CDs27-28 (+C) / N 1 Unknown / N or Normal 1 83 例 ? 地贫高风险胎儿产前诊断结果 * 诊断结果 基因型 例数 纯合子或双重杂合子 (总数) 18 CDs 41-42 (?TCTT) / IVS-2-654 (CT) 6 CDs 41-42 (?TCTT) / -28 (AG) 4 CDs 41-42 (?TCTT) / CD17 (AT) 2 IVS-2-654 (CT) / CD17 (AT) 2 CDs 41-42 (?TCTT) / CDs 41-42 (?TCTT) 1 CDs 41-42 (?TCTT) / CDs 27-28 (+C) 1 IVS-2-654 (CT) / CDs 71-72 (+A) 1 IVS-2-654(CT) / CD43 (GT) 1 总数 83 ( cont’d ) * 胎儿诊断 产前诊断例数 α地贫 β地贫 总数 (%) 正常 41 30 69 (25.6) 携带者 92 35 125 (46.3) 受累胎儿 *54 18 72 (