化脓性球菌和肠道菌说明讲义幻灯.pptVIP

化脓性球菌和肠道菌 微生物学教研室 实验目的 化脓性球菌是一大群能引起化脓性感染的致病菌,主要包括葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎双球菌、淋球菌等。 该类细菌在形态、排列、染色性及培养性上各不相同,可做为该类细菌鉴别的主要依据。 通过本实验,要求掌握以上细菌的形态、排列及染色特性、培养特性,并掌握脓标本的分离鉴定程序。 一、葡萄球菌的生长情况(示教) 观察3种葡萄球菌在固体培养基、血平板上的生长情况,菌落形态、大小、表面、边缘、透明度、颜色和溶血性。 金黄色葡萄球菌 金黄色 透明溶血环 表皮葡萄球菌 白色 无溶血环 腐生葡萄球菌 白色或柠檬色 无溶血环 二、链球菌的生长情况(示教) 观察3种链球菌在血平板上生长情况, 链球菌:在血琼脂平板上培养18~24小时,形成灰白色、圆形凸起、半透明或不透明的细小菌落。 甲型溶血性链球菌不完全溶血,在菌落周围形成草绿色溶血环, 乙型溶血性链球菌完全溶血、形成透明溶血环,丙型链球菌不发生形成圆形、光滑隆起透明似露珠的菌落。在血琼脂平板上不发生溶血溶血、无溶血环。 触酶活力试验 [原理] 具有触酶(过氧化氢酶)的细菌,能催化过氧化氢(H202)放出初生态氧,继而形成氧分子,出现气泡,借此可用于鉴别细菌。 [方法] 取洁净玻片一张,滴加3％ H202一滴,以取菌环分别取葡萄球菌和链球菌培养物少许,在H202中磨匀,立即(约30秒种)出现气泡者为阳性,同时应做盐水对照试验。 [注意事项] 1．试验应用的过氧化氢,浓度不宜过高,如应用30％的过氧化氢,则易出现假阳性结果。 2．培养物不应含有血液或其它体液,因为血液和体液中含有触酶,容易出现假阳性结果。 血浆凝固酶试验 [原理和意义] 致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶,使人或动物血浆发生凝固,因此,测定血浆凝固酶的有无是鉴定葡萄球菌致病性的重要依据。 [方法及结果] 玻片法: ①取干净玻片一块,用记号笔将玻片划成两格,其中一格加生理盐水,另一格加1:2人血浆。 ②用接种环取培养葡萄球菌菌落少许在生理盐水内研磨成细菌悬液,然后取此悬液1环与血浆混匀。 ③5分钟以内观察结果,若有凝块出现,即为阳性;若无凝块出现,则为阴性。 试管法: ①加入1:4血浆及葡萄球菌肉汤培养液。 ②将各管置37℃水浴中,每隔30分钟观察一次结果。 报告要求: 1．血浆凝固酶实验原理及结果。 2．报告脓标本的鉴定过程及结果 实验五 肠道杆菌 肠道杆菌 肠道杆菌是指寄居在人和动物肠道中或通过肠道引起疾病的一大群不产生芽胞的革兰氏阴性菌。营养要求不高,易于人工培养。需氧或兼性厌氧生长,生化反应活跃,抗原成分复杂。要从粪便的大量寄生菌中分离鉴定出致病菌,常需采用选择鉴别培养基。肠道菌之间的相互鉴别,主要依据其生化反应和血清学试验。 二、病原性肠道菌的分离培养与鉴定 粪便中存在许多细菌,有革兰氏阴性杆菌及弧菌,还有革兰氏阳性球菌及杆菌,本实验目的主要是了解肠道主要致病菌(沙门氏菌属及志贺氏菌属)的分离及鉴定步骤。 血、骨髓、尿 增菌培养 粪便标本 SS琼脂平板培养基 伊红美兰培养基 取可疑 菌落 G染色镜检 双糖铁培养基 半固体培养基 血清学鉴定 ? ? ? 其他生化鉴定