基因治疗基本知识.ppt

药物治疗 手术治疗 放射治疗 理疗 基 因 治 疗 一、概念 二、种类和策略 三、基本流程 四、应用与展望 一、基因治疗的概念 Gene therapy is a medical intervention based on modification of genetic materials in living cells. 基因治疗是指改变细胞遗传物质为基础的医学治疗。 概念的发展 经典概念：将具有正常功能的基因置换或增补患者体内的缺陷基因，从而达到治疗疾病的目的。 广义概念：将某种遗传物质转移至患者细胞内，使其在体内有效表达，最终达到治疗疾病目的的方法，均称之为基因治疗。 二、基因治疗的种类 根据基因导入的方式分为两种： 1. 直接体内疗法（in vivo） 是指将目的基因直接导入体内有关的组织器官，使其进入相应的细胞并进行表达。 2. 间接体内疗法（ex vivo） 是指在体外将目的基因导入靶细胞，经过筛选和增殖后将细胞回输给患者，使该基因在体内有效地表达相应产物，以达到治疗的目的。 根据基因导入的靶细胞分为两种： 1.生殖细胞基因治疗 生殖生物学问题复杂 伦理学问题 禁止应用人体 2.体细胞基因治疗： 研究重点 体细胞治疗的概念 指应用人的自体、同种异体或异种（非人体）的体细胞； 经体外操作后。 回输（或植入）人体的治疗方法。 基因治疗的策略 (一) 直接策略： 针对致病基因 (二) 间接策略： 导入与致病基因无直接联系的治疗基因 (一)直接策略 基因修正（gene correction） 基因替代（gene replacement） 基因增强（gene augmentation） 4. 基因干预（gene interference） 基因修正（gene correction） 指将致病基因的突变碱基加以纠正，而保留正常部分。 基因替代（gene replacement） 指通过同源重组（基因打靶）技术，将正常基因定点整合到靶细胞基因组内，以原位替换致病基因。 不涉及基因组整体改变的情况下对缺陷基因进行精确的原位修复，是最理想的治疗方式。 基因打靶技术 指目的基因导入靶细胞后，通过目的基因与靶细胞内染色体上同源DNA序列间的交换，将目的基因定点整合到靶细胞基因组上某一确定位点的技术。 3. 基因增强（gene augmentation） 成熟的策略 是指不去除异常基因，将有功能的正常基因导入病变细胞或其它细胞后发生非定点整合，表达正常产物以补偿缺陷基因的功能，或使原有的功能得以加强。 4. 基因干预（gene interference） 是采用特定的方法，导入外源基因选择性地阻断、干扰、抑制和封闭有害基因在DNA、RNA和蛋白质水平的表达及其生物合成。 导入抑癌基因 反义核酸技术 (antisense technology)： ①反义RNA；②反基因技术；③核酶 RNA干扰（RNA interference) 抑癌基因疗法 抑癌基因：是正常细胞内正常存在的，能抑制细胞转化和肿瘤发生的一类基因群。 Rb基因，p53基因，MTS基因，nm23基因 p53基因治疗研究： （1）野生型p53基因的替代疗法 （2）突变型p53基因的阻断疗法 （3）与p53基因有关的新型肿瘤疫苗 反义核酸 反义RNA技术 体外合成反义RNA，直接导入； 将特异的反义基因通过特定的表达载体（质粒、病毒）导入细胞，转录出反义RNA发挥作用，避免了在给药途径中易被RNase降解的缺点。 关键性问题 1. 专一性转移 如何专一的作用于病变细胞，而不影响其他正常细胞。 2. 反义RNA进入靶细胞前的降解问题 解决： 特定受体介导的反义RNA转移 受体介导的反义RNA转移 脱唾液酸糖蛋白（ASGP）受体介导的转移，通过化学物质作为中间连接物，将ASGP与多聚赖氨酸（PL）共价结合，得到ASGP-PL复合物，这种复合物可以携带RNA，再专一性地被肝细胞表面的ASGP受体所识别，并被吞噬到肝细胞内发挥作用。 反义RNA应用前景 1. 安全性高 不改变基因结构，最终在细胞内被降解。 2. 设计和制备方便 体外转录获得。 3. 具有剂量调节效应 4. 能直接作用于一些RNA病毒 核 酶 催化RNA切割和RNA剪接 核酶的特点 核酶具有稳定的空间结构，不易受到RNA酶的攻击。 核酶在切断mRNA后，又可从杂交链上解脱下来，重新结合并切割其他的mRNA，效率高于反义RNA。 RNA干扰技术 siRNA 慢性髓性白血病的发病机制