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中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，２７（８）：８７～９１ ＥＳＴ技术及其在哺乳动物早期胚胎研究中的应用 １，２ １ １，２ 胡　婕 　苗向阳 　冯浩咏 （１中国农业科学院北京畜牧兽医研究所　北京　１０００９４　２东北农业大学动物科技学院　哈尔滨　１５００３０） 摘要　ＥＳＴ（ｅｘｐｒｅｓｓｅｄｓｅｑｕｅｎｃｅｔａｇｓ，ＥＳＴ）是一段长约１５０～５００ｂｐ基因表达的外源序列片段，是 由大规模随机挑取的ｃＤＮＡ克隆测序得到的组织或细胞基因组的表达序列标签。一个ＥＳＴ代表 生物某一时期的某种组织或细胞的一个表达基因。主要综述了ＥＳＴ技术的原理方法，哺乳动物 早期胚胎研究的理论基础以及ＥＳＴ技术在早期胚胎研究方面的应用，并讨论了利用ＥＳＴ进行研 究分析的发展趋势。 关键词　表达序列标签（ＥＳＴ）　早期胚胎　基因 中图分类号　Ｑ８１９ 　　日新月异的现代生物技术推动了生命科学的迅猛 国国立卫生研究院（ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，ＮＩＨ） 发展，人类、水稻、小鼠、拟南芥、家蚕等生物基因组的 的生物学家 ＶｅｎｔｅｒＪＣ在人类基因组计划（Ｈｕｍａｎ 测序完成给揭示生命规律，了解生命起源，分析生物功 ＧｅｎｏｍｅＰｒｏｊｅｃｔ，ＨＧＰ）实施过程中提出了这种发现表达 能提供了大量的数据基础。但是由于实验条件不足、 ［１］ 基因的新方法 。该技术是将ｍＲＮＡ在体外反转录成 实验材料限制、数据过于庞大等多方面因素的限制，使 ｃＤＮＡ后克隆到载体上，构建 ｃＤＮＡ文库，再从 ｃＤＮＡ 得研究人员无法按照传统的方法对基因进行逐个的克 文库中大规模随机挑选ｃＤＮＡ克隆，对其３′端或５′端进 隆、研究、确定相互关系。有鉴于此，ＥＳＴ技术的出现给 行一步法测序（Ｓｉｎｇｌｅｒｕｎｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）获得 ＥＳＴ。ＥＳＴ 这些问题的解决带来了新的、有效的方法。早期胚胎 就是一段长约１５０～５００ｂｐ的基因表达的外源序列片 是生命发展的最初阶段，是揭示生命奥秘的基础，是细 ［２，３］ 段 。因为基因的ｍＲＮＡ剪接位点不同，所以可以获 胞生长、分裂最为旺盛的阶段，同时也是细胞具有全能 得多个ｃＤＮＡ的克隆，即ＥＳＴ可能对应于一个ｃＤＮＡ的 性的阶段，因此对其进行深入研究对生物的发育、分 某一部分，也可能代表 ｍＲＮＡ的不同剪接方式。因此 化、疾病等方面的研究有着重大的意义。通过 ＥＳＴ技 利用ＥＳＴ技术进行克隆基因或者分析基因的表达图 术，我们可以充分利用现有的数据库进行分析，减少实 谱，使得新基因的克隆和定位速度得到了飞跃性的发 验研究量，加快研究进程。 展；使得发现新基因的进度进一步加快，对已知基因功 １　基于ＥＳＴ的电子克隆技术 能的研究也进一步得到了完善。 　　伴随着近些年来飞速发展的计算机硬件技术和不 １．１　ＥＳＴ的基本原理 断普及的计算机应用技术以及联系越来越紧密的国际 　　表达序列标签（ｅｘｐｒｅｓｓｅｄｓｅｑｕｅｎｃｅｔａｇｓ，ＥＳＴ）是从 互联网技术，三大国际生物信息数据库———美国国家 生物体表达基因ｍＲＮＡ序列中导出的一段 ｃＤＮＡ序 信息中心（ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｏｆＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ， 列，包括了表达基因的编码区域的一部分。１９９