【发酵工艺学总论】第二章-工业发酵菌种.pptVIP

（3）冻结 液氮法的关键是先把微生物从常温过渡到低温。这样在细胞接触低温前，使细胞内自由水通过膜渗出而不使其遇冷形成冰晶而伤害细胞。 美国 ATCC采用先将菌液降温到0℃，再以每分钟降低1℃的速度，一直降低到－38℃，然后才把装有菌液的安瓿管放入液氮罐的气相中。由于液氮要蒸发，这样温度就会上升，冰晶状态发生变化，从而导致菌种死亡。所以要常常注意液氮的残存量，定期补加。 （4）重新培养 当要使用或检查所保存的菌种时，可将安瓿管从冰箱中取出，室温或35－40℃水浴中迅速解冻，当升温至0℃时即可打开安瓿管，将菌种移到适宜的培养基斜面上培养。 我国国内目前已有部分单位采用液氮法保存菌种。 四、菌种的衰退与复壮 （1）菌种衰退 菌种经过长期人工培养或保藏，由于自发突变的作用而引起某些优良特性变弱或消失的现象。 菌种退化的原因 基因突变； 变异菌株性状分离； 诱变的单菌落是由—个以上孢子或细胞形成 菌落由—个孢子或单个细胞形成，但它是多核细胞 单核孢子发生突变时，双链DNA上仅—条链上某个位点发生变化 连续传代 其它因素 菌种保藏不当 生长条件不满足（培养基组成、培养条件） 防止菌种退化的措施 控制传代次数 选择合适的培养条件 选择合适的保藏方法 菌种稳定性检查 分离复壮 （2）菌种复壮 使衰退的菌种重新恢复原来的优良特性。 复壮措施： 对已衰