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沙丁胺醇（SAL）酶免检测试剂盒使用说明书? 【产品代码：PVR33000】 试剂盒组成 SAL包被反应板 ………………………………………………………… 24/48/96孔 SAL标准溶液(0、0.1、0.3、0.9、2.7、8.1ppb) …………………… ………… 1套 SAL抗体工作液…………………………………………………………………1/2瓶 酶标二抗工作液…………………………………………………………………1/2瓶 显色液……………………………………………………………………………1/2瓶 终止液……………………………………………………………………………1/2瓶 浓缩洗涤液(20×）…………………………………………………………………1瓶 PBS缓冲液…………………………………………………………………………1瓶 酶标板框架………………………………………………………………………1块 仪器设备配置 微量移液器，量程20～200μL（建议尽可能选配8道或12道微量移液器） 酶标仪（带450nm波长） 小型粉碎机或均质机 离心机、振荡器或超声仪 恒温培养箱、氮吹仪或旋转蒸发仪 分析天平、冰箱 玻璃器皿：锥形瓶、烧杯、移液管、滤纸、漏斗等 另需准备的试剂：50mM盐酸溶液，氯化钠，2M 氢氧化钠溶液，异丙醇和乙酸乙酯。 操作流程图 加样 25℃，30min，min 25℃，min 酶标二抗反应——————→显色反应——————→结果判定 实验准备 样品处理：详见“样品处理方法”。 洗涤液的配制：浓缩洗涤液用蒸馏水稀释20倍，使用前稀释。（例如：3mL浓缩洗涤液+57mL蒸馏水，足够24孔使用）。 温度恢复：取出试剂盒中的检测试剂、待测样液，放置在室温及避光环境30min以上，恢复至室温，降低由于试剂温差引起的实验偏差。 实验步骤 试剂平衡：将试剂盒所有试剂取出，室温中放置30min以上，平衡至室温。 小孔编号：移取所需微孔放置反应板支架上，设置SAL标准溶液对照孔和样品孔（定量测定时设置1-6 号为标准对照孔，其余为样品孔；定性测定时设置1-2 号为标准对照孔，其余为样品孔）。 免疫反应：按系列步骤所示，依次加入配制好的溶液及待测样液。 操作次序 加入量 孔号 反应物组成表 1 2 3 4 5 6 　 50μL 0 0.1 0.3 0.9 2.7 8.1 待测样液 第二步 50μL SAL抗体工作溶液 第三步 摇匀 第四步 25℃，孵育30min 第一步：1-6号孔分别加入50μL SAL标准溶液（0、0.1、0.3、0.9、2.7、8.1ppb），其余孔加入相应的50μL待测样液。 第二步：向各微孔中分别加入50μL SAL抗体工作溶液。 第三步：轻轻振摇，使各孔中反应物混匀。 第四步：25℃，孵育30min。 洗涤：用力甩掉微孔中的反应液(甩3次)，在吸水纸上拍干(拍3次)。每孔加入250μL(约5滴)洗涤液，洗液不得溢出，放置1min，用力甩掉洗液(甩3次)，在吸水纸上拍干(拍3次)。按上述步骤重复洗涤3次，最后一次要保证微孔完全拍干。 酶标二抗反应：每孔加入100μL酶标二抗工作溶液，25℃，孵育30min。 洗涤：用力甩掉微孔中的反应液(甩3次)，在吸水纸上拍干(拍3次)。每孔加入250μL(约5滴)洗涤液，洗液不得溢出，放置1min，用力甩掉洗液(甩3次)，在吸水纸上拍干(拍3次)。按上述步骤重复洗涤3-4次，最后一次要保证微孔完全拍干。 显色 ：在每个微孔中加入100μL显色液，混匀，25℃避光显色15min。 终止：在每个微孔中加入100μL终止液，轻轻敲击微孔板，使反应物混匀。 读数：将反应板在5min内放入450nm酶标仪中读取吸光度值（OD值）。 结果计算 软件定量计算法 推荐采用国际领先的专业数据处理软件进行结果计算。欢迎免费索取软件。 作图定量计算法 将系列SAL标准溶液（0、0.1、0.3、0.9、2.7、8.1ppb）测得的吸光度OD值，绘制成标准曲线（见示意图）。横坐标为标准溶液浓度的常用对数值（lgC），纵坐标为各标准孔OD值与0ppb标准孔OD值的比值（B（标准液）／B（0ppb））。 沙丁胺醇（SAL）标准曲线示意图 （注：示意图仅供参考） 计算待测样品孔OD值与OD（0ppb）的比值（B样品/B（0ppb）），查标准曲线，可得到相应待测样液浓度（C）的常用对数值lgC，对其求反对数，可求得待测样液的SAL浓度C。按下列公式计算出