红细胞检验的基本方法精品.ppt

2、参考值： 正常人DAGT/IAGT试验均为阴性。 3、临床评价： 自身免疫性溶血性贫血 冷凝集素综合症 新生儿同种免疫性溶血 阵发性冷性血红蛋白尿 药物性免疫性溶血等 阳性： 冷凝集素试验 1、原理： 冷凝集素综合征的患者血清中存在冷凝集素，为IgM类完全抗体在低温时可使自身红细胞、O型红细胞 或与受检者血型相同的红细胞发生凝集。凝集反应的高峰在0～4℃，当温度回升到37℃时凝集消失。 2、参考值： 正常人血清抗红细胞抗原的IgM冷凝集素效价＜1:32。 3、临床评价： 冷凝集素综合征的患者为阳性，效价可达1:1000以上。淋巴瘤、支原体肺炎、疟疾、流行性感冒等可引起冷凝集素效价继发性增高。 谢谢！ 1、原理： 二、自身溶血试验及其纠正试验 红细胞在37℃孵育48小时，其间由于膜异常 引起钠内流倾向明显增加，ATP消耗过多； 或糖酵解途径酶缺乏所引起ATP生成不足等 原因可导致溶血，称为自身溶血试验。在孵 育时，加入葡萄糖或ATP作为纠正物，观察 溶血可否有一定的纠正，称为纠正试验。 2、参考值： 正常人红细胞孵育48小时,不加纠正物的溶血 率＜3.5％，加葡萄糖的溶血率＜1.0％，加 ATP纠正物的溶血率＜0.8％。 3、临床评价： ①遗传性球形红细胞增多症自身溶血率增加，加入葡萄糖或ATP后明显纠正。 ②G－6－PD缺乏症等戊糖旁路代谢缺陷的病人自身溶血率增加，能被葡萄糖纠正。 ③丙酮酸激酶缺乏症时不能利用葡萄糖产生ATP ,其自身溶血率明显增加，加葡萄糖不能纠正，加ATP可纠正。 ④获得性溶血性贫血或自身免疫性溶血时试验结果常各有不同，对诊断意义不大。 ⑤本试验不够敏感和特异，仅对遗传性球形红细胞增多症有较大诊断价值. 二、自身溶血试验及其纠正试验 1、原理： 三、红细胞膜三磷酸腺苷活性测定 Na＋－K＋－ATP酶、Ca2＋－Mg2＋－ATP酶和Mg2＋－ATP 酶都是红细胞膜上的ATP酶。为测定酶的活性可分别测定酶作用于ATP的水解产物无机磷含量，若在基质中只加入Ca2＋－Mg2＋－ATP酶可测定Ca2＋－Mg2＋－ATP酶的活性，若在基质中加入Na＋、K＋、Mg2＋和ATP，测定的为Na＋－K＋－ATP酶和Mg2＋－ATP酶的共同含量，再在基质中加入Na＋－K＋－ATP酶的抑制剂，测定结果仅为Mg2＋－ATP酶活性，两者的差为Na＋－K＋－ATP酶活性。 2、参考值: 红细胞膜Na＋－K＋－ATP酶：（2.93±0.67）mU／109 红细胞Ca2＋－Mg2＋－ATP酶：0.4～2.5μmol／L－1·mg 膜蛋白·h－1 3、临床评价： 遗传性球形红细胞增多症：Na＋－K＋－ATP酶活性增加，Ca2＋－Mg2＋－ATP酶活性减低。 蚕豆病：Ca2＋－Mg2＋－ATP酶活性降低。 许多药物作用于红细胞时，Na＋－K＋－ATP酶和Ca2＋－Mg2＋－ATP酶活性改变。 四、酸化甘油溶血试验 当甘油存在于低渗溶液氯化钠磷酸缓冲液时， 可阻止其中的水快速进入红细胞内，使溶血过 程缓慢。但甘油与膜脂质又有亲和性，可使膜 脂质减少。当红细胞膜蛋白及膜脂质有缺时， 它们在pH6.85的甘油缓冲液中比正常红细胞溶 解速度快，导致红细胞悬液的吸光度降至50％ 的时间（AGLT50）明显缩短。 2、参考值： 正常人AGLT50＞290s 3、临床评价： 遗传性球形红细胞增多症AGLT50明显缩短 （25～150s）。自身免疫性溶血性贫血、肾 功能衰竭、妊娠等AGLT50也可缩短。 1、原理 五、高渗冷溶血试验 在高渗状态下，温度骤然变化影响红细胞膜脂质的流动性，并可能累及膜磷脂与膜骨架蛋白结合位点，红细胞容易破裂而发生溶血。当膜蛋白缺陷致膜表面积与体积比值降低，溶血率明显增加。而膜表面积与体积比值增加，溶血率降低。高渗冷溶血试验（hyperosmotic cold hemolysis test）即测定红细胞在不同浓度的高渗缓冲液中，从37℃水浴立即置于0℃水浴一定时间的最大溶血率。 2、参考值： 9mmol／L或12mmol／L蔗糖 最大溶血率66.5％～74.1％ 7mmol／L蔗糖 最大溶血率0.1％～16.9％ 3、临床评价： ①遗传性球形红细胞增多症明显增加。 ②珠蛋白生成障碍性贫血和异常血红蛋白病明显降低。 ③自身免疫性溶血性贫血基本正常。 1、原理： 六、红细胞膜蛋白电泳分析 1、原理： 将制备的红细胞膜样品进行SDS－PAGE(SDS-聚丙烯酰胺凝胶)电泳，根据样品中各蛋白相对分子质量的不同，分离得到红细胞膜蛋白的电泳图谱，从而可见各膜蛋白组分百分率。 2、参考值： 各种膜蛋白组分百分率变化较大，多以正常红 细胞膜蛋白电泳图谱作比较；或以带3蛋白为 基准，各膜蛋白含量以与带3蛋白的比例表示。