浙江自然科学奖项目公示-浙江大学化工学院.PDFVIP

浙江省自然科学奖项目公示 一、项目名称： 酶的制备、分子改造及应用基础研究 二、项目简介： 项目对具有重要应用价值的谷氨酸脱羧酶（GAD ）、细胞色素P450 BM-3 和纳豆激 酶等3 种酶的制备、酶学性质进行了较为系统的研究，在此基础上采用定向进化技术对 GAD 和P450 BM-3 进行了分子改造，通过酶学性质表征、同源建模、分子动力学模拟 等技术探讨了突变位点与酶结构、酶催化活性及其稳定性之间的关系，并对生物催化制 备γ-氨基丁酸（GABA ）、靛玉红等重要化合物的过程进行了研究，推动了酶工程研究理 论的发展，并为几种化合物的规模化制备奠定了基础。成果包括： 1）对Lactobacillus brevis 中GAD 进行了重组表达、纯化，采用悬滴蒸汽扩散法获得了 高质量的GAD 晶体，利用X-ray 衍射得到GAD 晶体衍射数据以及采用分子置换法解析 其晶体结构，在世界上首次获得了乳酸菌GAD 的晶体三维结构，已在Protein data Bank （PDB ）进行登录（ID ：5GP4 ）； 2 ）建立了基于比色法的GAD 活性高通量筛选方法，采用易错PCR 和定点饱和突变对 GAD 进行分子改造，筛选到催化活力、稳定性等显著提高的突变酶Q51H、K413I 、S307N；