脂肪酸的-氧化.pptVIP

实验七 脂肪酸的β-氧化 一、实验目的 了解脂肪酸的β-氧化作用 通过测定和计算反应液内丁酸氧化生成丙酮的量，掌握测定β-氧化作用的方法及其原理 二、实验原理 在肝脏中，脂肪酸经β氧化作用生成乙酰辅酶A。2分子乙酰辅酶A可缩合生成乙酰乙酸。乙酰乙酸可脱羧生成丙酮，也可还原生成β-羟丁酸。乙酰乙酸、β-羟丁酸和丙酮总称为酮体。酮体为机体代谢的中间产物。 酮体为机体代谢的中间产物。在正常情况下，其产量甚微；患糖尿病或食用高脂肪膳食时，血中酮体含量增高，尿中也能出现酮体。 2NaOH+I2 NaOI + NaI + H2O CH3COCH3+3NaOI CHI3+CH3COONa+2NaOH 剩余的碘用标准硫代硫酸钠溶液滴定： NaOI+NaI+2HCl I2+2NaCl+H2O I2+2Na2S2O3 Na2S4O6+NaI 根据滴定对照与滴定样品所消耗的硫代硫酸钠溶液体积之差，可以计算由丁酸氧化生成丙酮的量。 三、实验器材 5ml微量滴定管 恒温水浴 吸管 剪刀 50ml 锥形瓶 漏斗 试管及试管架 四、试剂与材料 鲜猪肝：0.5g/ml 0.5%淀粉溶液 0.9%氯化钠溶液 0.5M丁酸溶液：取5ml丁酸溶于100ml 0.5M氢氧化钠溶液中 15%三氯乙酸溶液 10%氢氧化钠 10%盐酸 0.2M碘液：25.4gI2+50gKI定容到1000ml 用标准0.05M硫代硫酸钠标定 标准0.01M硫代硫酸钠： 将已标定的0.05M硫代硫酸钠稀释成0.01M 1/15M PH7.6磷酸缓冲液： 1/15M Na2HPO4 86.8ml+1/15M NaH2PO4 13.2ml 五、操作步骤 肝糜制备：取肝用0.9%NaCl冲洗污血，用滤纸吸去表面水分。称肝组织5g置研钵中，加少量的0.9%NaCl研成细浆。再加0.9%NaCl到总体积10ml。 取2个50ml锥形瓶，各加入3ml 1/15M磷酸盐缓冲液（pH7.6）。其中一个锥形瓶中加2ml正丁酸，另一个锥形瓶中不加正丁酸（对照）。再各加入2ml肝糜。混匀于43℃恒温水浴内保温1.5小时。 沉淀蛋白：取出锥形瓶，各加入3ml 15%三氯乙酸，混匀，静置15min。对照瓶内追加2ml正丁酸，混匀。分别过滤，滤液收集在2支试管中。 酮体测定：吸取两种滤液各2ml分别放入另2个锥形瓶中，各加3ml 0.1M碘液和3ml 10%NaOH。摇匀，静置10min。加入6ml 10%盐酸中和。 用0.01M标准硫代硫酸钠滴定剩余的碘。滴至浅黄色时，加入3滴0.1%淀粉作指示剂。摇匀，滴至蓝色消失为止。记录所消耗的硫代硫酸钠液的ml数。 肝脏的丙酮含量（mmol/g） =（A—B）* CNa2S2O3 * 1/6 *5 A：滴定对照所消耗的0.01M硫代硫酸钠溶液的ml数 B：滴定样品所消耗的0.01M硫代硫酸钠溶液的ml数 CNa2S2O3:标准硫代硫酸钠溶液的浓度（M） 1/6：1mol标准硫代硫酸钠相当于丙酮的量 * * 碘仿 本实验用新鲜肝糜与丁酸保温，生成的丙酮在碱性条件下，与碘生成碘仿。反应式： 5、结果计算