枯草芽孢杆菌芽孢表面展示外源功能蛋白的应用.PDFVIP

* 枯草芽孢杆菌芽孢表面展示外源功能蛋白的应用 冯 杰 1 王振华 2 潘康成 1* (1. 四川农业大学动物医学院，成都 611130 ；2.成都农业科技职业学院畜牧兽医分院，成都 611130) 摘 要：枯草芽孢杆菌是一种好氧的可直接用于人和动物的益生菌菌种，在不利条件下可以 被诱导产生芽孢。芽孢具有特殊的构造及独特的生理特征，研究者们发现枯草芽孢杆菌芽孢 是酶和免疫原等外源性功能蛋白的理想的锚定载体，以枯草芽孢杆菌芽孢衣壳蛋白作为分子 1 载体，直接利用芽孢吸附作用和共价固定等方法使外源蛋白锚定在芽孢表面。目前已有多种 v 3 酶蛋白、抗原蛋白和其他功能蛋白成功展示在枯草芽孢杆菌芽孢表面。本文主要对枯草芽孢 1 1 2 杆菌芽孢结构及芽孢表面展示外源蛋白技术的策略和应用前景进行阐述。 0 . 1 关键词：枯草芽孢杆菌；芽孢表面展示；共价固定；载体 1 7 1 中图分类号：S811.6 文章标识码： 文章编号： 0 2 : 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是产芽孢的革兰氏阳性菌，因其益生特性及芽孢 良好的 v i X 抗逆性而备受研究者青睐。芽孢表面展示技术是利用芽孢特殊的构造，采用一定的策略将外 a n [1] i 源性功能蛋白锚定在芽孢表面，使该蛋白发挥更佳的功能及稳定性。Isticato 等 首次利用芽 h c 孢衣蛋白 CotB 作为锚定蛋白，将破伤风毒素的 C 片段(TTFC)成功地展示在芽孢表面。芽孢 表面展示技术凭借其操作简单、重组芽孢的稳定性好等特点，现已成功地应用于黏膜疫苗、 生物催化、生物降解和诊断工具等多个领域。枯草芽孢杆菌芽孢表面展示技术现在逐渐发展 [2] 为以基因重组和非基因重组 2 种锚定方式的表面展示策略 。基因重组方式是以芽孢衣蛋白 如 CotB 、CotC 、CotE 、CotG 、CotZ 和 OxdD 等作为锚定蛋白，将外源蛋白与芽孢衣蛋白进 收稿日期：2017-04-19 基金项目：“ 四川省高等学校科技创新团队”资助项目(KM406183.1) 作者简介：冯 杰 （1992- ），男，四川自贡人，硕士研究生，从事动物微生态学研究 。E-mail ： fengjie9201@163.com *通信作者：潘康成，教授，博士生导师，E-mail ： pankangcheng71@126.com 行融合表达展示在芽孢表面[1,3-7] ；非基因重组方式是利用芽孢与外源蛋白的吸附作用或使用 交联剂如戊二醛等将外源蛋白锚定在芽孢表面[8-9] 。 1 芽孢的形成及结构 1.1 芽孢形成 枯草芽孢杆菌在遭受不利条件下，经过一系列时序性和空间性的基因表达，最后形成 圆形或椭圆形的休眠体—— 芽孢，以抵御不良环境。枯草芽孢杆菌营养性细胞形成芽孢与一 系列反馈和前馈反应密切相关[10] 。外界环境通过激活内部磷酸化级联反应，影响关键转录 1 蛋白 Spo0A 的磷酸化水平来调控营养性细胞向芽孢化转变。Spo0A 蛋白低水平的磷酸化促 v 3