HPLC的保养和故障排除汇.ppt

HPLC的保养和故障排除 HPLC的日常操作条件 最好是恒温、恒湿 温度：15—30℃ 相对湿度80% 房间应有良好的通风 空调或其他设备产生的气流不要直吹仪器 避免光线直射 远离高电干扰、高振动设备 泵的使用与维护注意事项 防止任何固体微粒进入泵体（0.2um或0.45um的微孔滤膜过滤） 流动相不应含有任何腐蚀性特质，含有缓冲液的流动相不应保留在泵内 泵工作时防止溶剂瓶内的流动相用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、密封圈，最终产生漏液 输液泵的工作压力决不要超过规定的最高压力 流动相应先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量的稳定性 缓冲液的使用 使用前必须过滤 使用后一定要进行清洗 ，以免造成腐蚀、磨损、阻塞: 第二天接着用：用20%甲醇：80%水冲洗20-30分钟 隔几天再用：用甲醇：水冲洗后，再用纯甲醇冲洗 易受到细菌和霉菌的影响 流动相的过滤 过滤：0.45um或更小孔径滤膜 目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其在使用无机盐配制的缓冲液时 过滤膜种类 水系过滤膜 水系滤膜严禁用于有机溶剂，否则滤膜会被溶解 有机系过滤膜 流动相的脱气 脱气 目的：除去流动相中因溶解或混合而产生的气泡 产生原因： 温度上升 压力下降 溶剂混合 流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯容器中，不能贮存在塑料容器中。 容器一定要盖严，防止溶剂挥发引起组成变化，也防止氧和二氧化碳溶入流动相。 磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉，应临用现制。 容器应定期清洗，以除去底部的杂质沉淀和可能生长的微生物。 流路中形成气泡引起的问题 改变保留时间和峰面积 流动相中形成气泡对液流的不良影响 泵中形成气泡使液流波动 峰变形 柱中气泡形成和累积使流动相绕流 尖峰或锯齿状噪声 检测池中气泡形成和累积产生基线噪声 输液泵发生故障及相应排除措施 故障 可能原因 解决办法 进样器的保养 柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动 当柱子和色谱仪联结时，阀件或管路一定要清洗干净 要注意流动相的脱气 避免使用高粘度的溶剂作为流动相 进样样品要提纯 控制进样量 每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品 每天工作结束后用适当的溶剂来清洗柱 当分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存 检测器的保养 紫外灯的保养：分析前，柱平衡差不多时，打开检测器；在分析完闭后，先关紫外灯。（频繁的开关灯会缩短灯的使用寿命） 样品池要保养 1）用HPLC级溶剂 2）过滤流动相和溶剂 3）脱气 4）不让水或腐蚀性溶剂滞留泵中 出现双重峰或 分叉峰 解决问题 可能原因 样品体积过大； 色谱柱过载 溶解样品的溶剂选用不当 色谱柱有“塌陷”、短流或断流 色谱柱滤网堵塞 进样器没有彻底清洗 解决办法 减少进样体积； 稀释样品； 将样品在流动相中溶解 更换色谱柱； 使用较温和的分离条件 更换色谱柱的滤网； 使用柱前过滤装置； 过滤样品 彻底清洗进样器； 更换进样器转子 保留时间变长 解决问题 可能原因 流速降低 硅胶表面有活性点 键合相流失 流动相的组成有变化 温度降低 解决办法 检查系统是否有漏； 更换泵的密封圈； 排净气泡； 使用流动相改性剂（如加入三乙胺）； 使用碱性去活的色谱柱 保持流动相pH值在2-7.5 范围内 检查泵；检查滤网； 防止流动相的挥发或降解 使用色谱柱恒温箱 保留时间缩短 解决问题 可能原因 流速升高 色谱柱过载 键合相流失 流动相组成发生变化 温度升高 色谱柱老化 解决办法 检查泵；检查流速 降低样品的浓度或进样体积 流动相的pH值保持在2-7.5 范围内 检查泵；检查滤网； 防止流动相的挥发或降解 使用色谱柱恒温箱 更换色谱柱； 使用预柱 保留时间 无规则改变 解决问题 可能原因 流速发生变化 色谱柱尚未平衡； 流动相组成发生变化； 流动相中的溶剂互溶性差 色谱柱温度发生变化 杂质在色谱柱中“堆积” 解决办法 检查是否有漏； 更换泵的密封； 排净气泡 至少用10倍柱体积的流动相 平衡色谱柱； 检查泵；检查滤网； 防止流动相的挥发或降解 使用色谱柱恒温箱 冲洗色谱柱； * * 流动相的选择 采用 “HPLC” 级溶剂 对试样有适宜的溶解度 溶剂粘度要小 与检测器相匹配 溶剂的等级 HPLC级 优级纯 分析纯 溶剂等级 微量分析、梯度洗脱 都经过蒸馏和0.45u的过滤(除纤维毛,未溶解的机械颗粒) 优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂 HPLC级经过0.2u的过滤,且