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官方说明书大鼠17-酮类固醇(17-KS)酶联免疫分析试剂盒 使用说明书
rat 17- Steroid ketones (17-KS) elisa immunoassay kit Manual
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大鼠17-酮类固醇(17-KS)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供体外研究使用!
预期应用
ELISA 法定量测定大鼠尿液或其它相关生物液体中17-酮类固醇(17-KS)含量。
实验原理
用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗17-KS 抗体的微孔中依次加入标本或
标准品、生物素化的抗17-KS抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB 显色。
TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅
和样品中的17-KS呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD值),计算样品
浓度。
试剂盒组成及试剂配制
1.酶联板:一块(96 孔)
2.标准品(冻干品):2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10 分钟以
上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为5,000ng/ml,做系列倍比稀释(注:不要直接
在板中进行倍比稀释)后,分别稀释成5,000 ng/ml,2,500 ng/ml,1,250 ng/ml,625 ng/ml,
312 ng/ml,156 ng/ml,78 ng/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml,临用前15 分钟内
配制。如配制2,500 ng/ml 标准品:取0.5ml (不要少于0.5ml ) 5,000 ng/ml 的上述标准品
加入含有0.5ml 样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3.样品稀释液:1×20ml。
4.检测稀释液A:1×10ml。
5.检测稀释液B:1×10ml。
6.检测溶液A:1×120μl(1:100)临用前以检测稀释液A 1:100 稀释,稀释前根据预先计算
好的每次实验所需的总量配制(100μl/孔),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl 检测溶
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液A加990μl 检测稀释液A 的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
7.检测溶液B:1×120μl/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B1:100 稀释。稀释方法同检测溶
液A。
8.底物溶液:1×10ml/瓶。
9.浓洗涤液:1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10. 终止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
11. 覆膜:5 张
12. 使用说明书:1 份
自备物品
1. 酶标仪(建议参考仪器使用说明提前预热)
2. 微量加液器及吸头,EP 管
3. 蒸馏水或去离子水,全新滤纸
标本的采集及保存
1.尿液:请收集清晨第一次尿液(中段尿),或24 小时尿液,2000
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