第七章层析分离技术（）——凝胶过滤资料.pptVIP

7.2 凝胶过滤层析四、凝胶过滤层析的影响因素 1. 凝胶介质的选择 2. 层析柱的选择 3. 上样量 4. 洗脱流速 * 1. 凝胶介质的选择 选择凝胶介质时主要考虑样品的性质、分离目的及操作条件等。 根据样品的性质（如目标分子与杂质分子的分子量大小、形状）来选择不同型号的凝胶介质。 一般排阻极限应大于目标分子，而分级范围应当涵盖目标分子的大小。 根据分离样品的数量和目的，凝胶过滤层析可分为： 分析型：应选择凝胶颗粒直径较小的介质（如中型、细型及超细型等规格），从而获得较高的柱效及分辨率。 制备型：可选择颗粒较粗、价格相对较低、机械强度较大、能提供较快流速、又易于清洗和重复使用的凝胶介质。 另外在特殊情况下，洗脱剂中需要添加一些变性剂（如盐酸胍或尿素）或去污剂（如SDS）来增加样品的溶解性，此时选择凝胶介质时应考虑其对这些特殊物质的耐受性。 * 2. 层析柱的选择 在凝胶过滤层析过程中，为了达到最佳的分离效果，一般要求选择细长的层析柱。 如用凝胶过滤层析法分离蛋白质，层析柱的长度通常为内径的25~40倍。 但过长的柱子，凝胶所承受的压力会很高，这就要求选择价格昂贵的耐高压型的凝胶介质与之相适应，从而限制了工业规模的凝胶过滤层析技术的应用。 人们开发了一种叠积柱系统，即把凝胶介质分别装入同样大小的短粗的层析柱中，然后再将这些柱子垂直地连成一套，柱子之间的连接