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2018-05-09 发布于河南
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单向扩散试验.ppt

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单向扩散试验

单向扩散试验实验原理定量试验平板法：将抗体与熔化的琼脂均匀混合，倾注平板，凝固后在琼脂板上打孔，孔中加入抗原溶液，放室温或37℃让其向四周扩散，24～48h后，可见孔的周围出现沉淀环。抗原在一定的浓度范围内，沉淀环的直径和抗原的量成正相关。主要的试剂和器材人全血清（作为待测）试剂：IgG参考（11.43mg/ml 25μι）抗IgG 1.5％琼脂器材：玻片、打孔器、微量进样器、37℃水浴箱实验步骤制板用移液管吸10ml琼脂加到含有0.1ml抗IgG的试管中，颠倒混匀，马上浇板，待冷却凝固。打孔用打孔器打12个孔，孔径3mm，孔距10mm。稀释IgG参考稀释人全血清用生理盐水进行50倍稀释。加样五个稀释度的IgG参考和稀释的人全血清，每个加两孔，每孔9μι 。温育放在湿盒中，37℃，24h。结果观察和记录孔的周围会出现白色的沉淀环，量出各个沉淀环的直径（Ф）。结果计算以直径为横坐标，以IgG参考的浓度的对数值为纵坐标，制作标准曲线，从而计算出待测血清中IgG的浓度。注意事项浇板用的玻片要洁净。制备抗体琼脂板时，琼脂温度要严格的控制。温度太低会导致琼脂凝固，太高将影响所加抗体的活性。加样孔中的琼脂应挑干净，且不可损坏孔的边缘，确保每孔的液面基本一致。加样时，不能将样品加到孔的外面。 * 125 125 125 50 475 生理盐水（ μl ） 125 125 125 200 25 IgG参考（μl） 5 4 3 2 1 *