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毛细管电泳原理及技术简介 主 要 内 容 第一章 概述 第二章 毛细管区带电泳 第三章 检测器选择 第四章 分离条件选择流程 第五章 各类物质的分离要点 第六章 毛细管电泳的应用举例 分离/分析工具回顾 ~1950 ------ PC ~1960 ------ TLC ~1970 ------ GC ~1980 ------ HPLC , Gel Electrophoresis ~2000 ------ CE ?2010 ------ Chip? 什么是毛细管电泳？ 使用(10-200 um i.d.)的毛细管 作为分离管 以高压直流电为分离动力（0-30KV） 其分离原理属于电泳现象 Capillary Electrophoresis (CE) 毛细管电泳： 指一系列以内径10-200um的毛细管柱为分离通道，以高压直流电为分离动力对大分子和小分子等进行高效分离和检测的有关技术的统称。 毛细管电泳的基本原理 电泳(electrophoresis)也叫电迁移(electromigration)，其宏观表现是介质的导电。后来，电迁移现象被用于物质的分离，随之形成了一系列电泳技术或方法，这些方法也被简称为电泳。 电泳和色谱类似 分离过程相类：电泳和色谱分离都是速差过程。 正因为如此，电泳特别是毛细管电泳通常采用色谱中的一些概念或名词，比如分离效率（N），理论板，保留时间（tR）等等。也正因为如此，毛细管电泳才能把电泳和色谱统一起来，变成一种新的方法。 毛细管电泳的特点 容积小 侧面/截面积比大因而散热快可以承受高电场 可使用自由溶液、凝胶等为支持介质 在溶液介质下能产生平面形状的电渗流 毛细管电泳分离的优点 存在的问题 制备能力差 光路太短，非高灵敏度的检测器难以测出样品峰 凝胶色谱填充管需要专门的灌制技术 大的侧面/截面积能“放大”吸附作用，导致蛋白质等的分离效率下降或无峰 吸附引起电渗变化，进而影响分离重现性等，目前尚难以定量控制电渗 毛细管电泳的主要模式（1） 毛细管区带电泳（CZE） 毛细管胶束电动色谱（MECC） 毛细管凝胶电泳（CGE） 毛细管等电聚焦（CIEF） 毛细管电动色谱（EKC） 毛细管电色谱（CEC） 毛细管等速电泳（CITP） 亲和毛细管电泳（ACE） 非水相毛细管电泳（NACE） Separation Modes分离模式（2） 毛细管胶束电动色谱（MECC Micellar Electrophoresis capillary Chromatography） 电解质中加入表面活性剂，如十二烷基磺酸钠（SDS），使之形成胶束，样品根据疏水性强弱的差异，在胶束与电解质的分配系数的不同来进行分离。不同疏水性的离子和胶束的相互作用不同，疏水性强的作用力就大，保留时间就长；反之，保留时间就短。 毛细管凝胶电泳(CEG) 凝胶电泳是用凝胶物质作为支撑物进行分离的区带电泳。毛细管内先填充凝胶，此时，凝胶在毛细管内形成分子筛，样品依分子量的大小在毛细管内移动速度不同而进行分离。分子量大的首先被分离出来，其后是较小的分子。多用于蛋白质以及核酸片断的分离。 毛细管等点聚焦 (CIEF) 两性电解质在分离介质中的迁移形成pH梯度，各种不同等电点的蛋白质按照这一梯度迁移到它们等电点的那个位置，并在该点停下，由此产生一条非常窄的聚焦区带，并使不同的蛋白质聚焦在不同的位置上。 毛细管等点聚焦的运行过程，可分为三个步骤： A 进样 。把样品与两性电解质混合并进样。 B 聚焦 。加高压3-4分钟，使整个毛细管长度范围内建立一个pH梯度，以便让样品在毛细管中向各自的等电聚焦点移动，形成一条由不同组分排列的带子。 C 迁移。阴极的缓冲液换成盐类后，再加上电压，使末段引起梯度降低，让已聚焦组分一个一个通过检测器。 毛细管电色谱（CEC） 在毛细管中装添了液相色谱的各种填料，相当于固定相，应用电泳中的EOF电渗流作为动力，电解质相当于流动相。各种小分子、极性或中性化合物在两相之间迁移而形成分离。毛细管电色谱尤其适应于小分子的分离。 发展最早的一种电泳手段 应用最为广泛 主要应用于能解离成分检测，如蛋白质、多肽及带电荷的大小分子（天然药物中的生物碱类、黄酮类成分的分析，应用广泛） 蛋白质、肽、氨基酸等两性样品，pH2或pH9 糖类样品通常在pH=9~11 羧酸或其它类样品多在pH=5~9 -- 分离原理