奥林巴斯IX73倒置荧光显微镜使用说明-复旦大学遗传工程国家重点.PDF

复旦大学生命科学学院 遗传工程国家重点实验室 奥林巴斯 IX73 倒置荧光显微镜使用说明 本内容主要分为以下几个章节: 一、明场方式的使用说明 二、相差方式的使用说明 三、微分干涉（DIC）方式的使用说明 四、荧光方式的使用说明 五、软件的相关使用说明 六、图片组合的使用说明 七、图像拼接的使用说明 八、景深扩展的使用说明 九、时间序列的使用说明 十、维护与保养 注：荧光开关是桔黄色荧光笔标注。拷贝数据请用新的光盘。 一、明场方式的使用说明 1．打开明场光源A； 2．摁下显微镜机身前B 按钮，并调节光强旋钮以获得合适的光强； 3．选择适当的物镜，并将聚光镜上的调节环D 转至 5 号位即 BF； 4．将荧光滤光块F 转至 5 号位即 BF； 5．根据需要将光路切换杆调至 100%目镜或50%相机和 50% 目镜的位 置； 6．调节调焦旋钮，获得清晰的明场图像。 1 复旦大学生命科学学院 遗传工程国家重点实验室 二、相差方式的使用说明 1．打开明场光源A； 2．摁下显微镜机身前B 按钮，并调节光强旋钮以获得合适的光强； 3．根据需要,选择 4X，10X，20X，40X 中的一个物镜，并将聚光镜上 的调节环D 转至相应的号位（4X 物镜用 PHL；10X 和 20X 物镜用 PH1； 40X 物镜用 PH2）； 4．将荧光滤光块F 转至 5 号位即 BF； 5．根据需要将光路切换杆调至 100%目镜或 50%相机和 50% 目镜的位 置； 6．调节调焦旋钮，获得清晰的相差图像。 三、微分干涉（DIC）方式的使用说明 1．打开明场光源A； 2．摁下显微镜机身前B 按钮，并调节光强旋钮以获得合适的光强； 3．将起偏镜移动手把即C 推至右侧； 4．选择60X 的物镜，并将聚光镜上的调节环D 转至 4 号位； 5．将DIC 滑座即 E 向里推入至卡住； 6．将荧光滤色块 F 转至 4 号位即 DIC； 7．根据需要将光路切换杆调至 100%目镜或 50%相机和 50% 目镜的位 置； 8．调节调焦旋钮，获得清晰的微分干涉图像。 2 复旦大学生命科学学院 遗传工程国家重点实验室 四、荧光方式的使用说明 1．在明场观察方式下获得清晰的图像后,调节光强旋钮至最弱,并关 闭显微镜机身前B 按钮 (如果不再使用明场方式观察,请将明场光源 A 关闭)； 2．接下来请查看荧光开关,即桔黄色荧光笔标注； 3．打开荧光光源A，接着打开 SHUTTER 开关 B； 4．根据需要,将荧光滤色块 F 转至 1、2、3、6 中的一个号位； 5．按压一次外接控制器圆按键C 打开荧光（再按压一次即会关闭）， 并旋转圆按键 C 调节荧光光强； 6．根据需要将光路切换杆调至 100%目镜或 50%相机和 50% 目镜的位 置； 7．调节调焦旋钮，获得清晰的荧光图像。 五、软件的相关使用说明 1．当获得清晰的明场图像后,将光路切换杆调至 100%相机位置； 2．打开CB5S 开关； 3．打开 cellSens 软件后，首先在摄像控制工具窗口中切换相机芯 片为 “彩色模式”即出现红绿蓝条纹按钮，此时相机自动切换为彩色 芯片进行明场图像采图； 4．接下来点击 “实时观察”对样品进行预览，随后在摄像控制工具 窗口中将曝光模式调节为 “自动”，最后将曝光模式调节到 “手动”， 通过增加或减少曝光时间来获得满意的观察效果； 3 复旦大学生命科学学院 遗传工程国家重点实验室 5．如果明场图像背景不够干净，可以在摄像控制工具窗口中执行白 平衡操作，点击 “白平衡”后框选预览图像中样品之外的背景区域， 即可执行白平衡； 6．根据实验需求，调节拍照的分辨率后点击 “拍照”即可完成对当 前预览图像的及时拍照，对该图像另存到指定文件夹，图像默认保存 格式为 “TIF”格式。 1．当获得清晰的荧光图像后,将光路切换杆调至 100%相机位置； 2．打开CB5S 开关； 3．打开 cellSens 软件后，首先在摄像控制工具窗口中切换相机芯 片为 “灰度模式”即黑白渐进按钮，此时相机自动切换为黑白芯片进 行荧光图像采图；接下来勾选高级荧光模式 “SFL”；