动物的克隆-浙科版课件.pptVIP

思考：离体的植物细胞和组织可以通过组织培养技术克隆成完整的植株，那么动物细胞和组织能否也进行同样的克隆？ 不能，动物细胞的全能性受到限制，到现在为止将离体的动物细胞直接克隆成个体还很困难，所以动物细胞和组织不能进行与植物一样的个体克隆。 机械消化或者胰酶消化 一、动物细胞、组织培养 1、什么方法取得离体的单个动物细胞？ 2、离体的动物细胞能否正常的生活、表现出正常的生命活动？ 能，在人工控制的培养条件下，生长、分裂乃至接触抑制和衰老、死亡等，并呈现一定的组织特性。 3、是不是所有的动物细胞都能在离体的情况下表现出生命活动？ 1、幼嫩细胞（如：动物胚胎或幼龄动物组织、器官） 2、含全部营养物质的液体培养基和适宜的环境条件。 （胰蛋白酶） 动物细胞培养：体外培养分散后的单个细胞，使其得以生存，并保持生命活动现象。像体内一样呈现一定的组织特性。 动物组织培养：体外培养动物组织，使其维持生活状态或生长特性。可以伴随组织分化，但最终成为细胞培养。 动物器官培养：体外培养动物器官原基、部分或整个器官，使之得以保存、生长。保持器官的结构、功能及分化能力。 组织培养 6.1951年，海拉细胞系的建成。 1.1885年，鸡神经板在生理盐水中培养成活。 2.1903年，皮肤及白细胞在腹水及血清中存活一个月，且观察到细胞分裂。 3.1907年，蛙胚神经管在蛙淋巴液中悬浮培养，成功看到神经末端的阿米巴运动。 4.1912年，鸡胚浸出液对鸡胚心脏组织块进行原代培养和传代培养。 5.1943年，获得长期培养细胞系（可连续传代）和细胞克隆。 “组织培养”一词产生 真正的组织培养开始； 创立了悬浮培养法 成功进行了传代培养； 发明了卡氏瓶； 标志着组织培养工作进入全新阶段 二、动物组织培养技术的发展 2、适宜的环境条件 无菌、无毒环境：加抗生素，定期更换培养液 适宜的温度和pH值：温度：36.5±0.5 ℃ pH值：7.2-7.4 适宜的气体环境：O2和CO2（95%空气和5%CO2） 适宜的渗透压等 （一）培养条件 三、动物细胞培养过程 成分：无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素和动物血清等 1、含全部营养物质的培养液 从动物胚胎或幼龄动物组织切片中取小片样品 转入特殊培养液 原代培养 分装到多个卡氏瓶中 传代培养 单个细胞悬浮液 CO2培养箱中保温培养 细胞系 机械消化或胰酶消化 （胰蛋白酶） （二）培养过程 原代培养物 选择或纯化 选择或纯化 细胞株 细胞株 如何界定原代培养和传代培养？为什么要传代培养？ 细胞悬浮液 转入特殊培养液首次培养 换瓶后培养 原代培养 传代培养 为什么？ 原代培养 传 代 培 养 ………… 原代培养物 细胞系：可连续传代的细胞 原代培养物在首次传代时就成为细胞系。 能连续培养的 连续细胞系 不能连续培养的 有限细胞系 四、细胞系、细胞株 （二倍体细胞） （异倍体核型细胞） （1）恶性细胞系，异体致瘤性 （2）保留接触抑制，不致癌 2、细胞株： 通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞系。 如：单抗细胞株 细胞株一般具有恒定的染色体组型、同工酶类型、病毒敏感性和生化特性等。遗传物质未改变。 连续细胞株：可连续多次传代的细胞株。 有限细胞株：传代次数有限的细胞株 细胞系：泛指可传代的细胞。 细胞株: 具有特殊性质的细胞系。 五、克隆培养法（细胞克隆） 1、概念： 把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体的技术。 2、特点： 遗传性状均一、表现的性状相似，便于研究 异质性细胞系 克隆培养 纯系（克隆） 3、最基本要求: 保证所建成的克隆来源于单个细胞 4、适合于克隆的细胞： 对环境有较大适应范围和具有较强独立生存能力的细胞 5、提高细胞克隆形成率的措施： 选择适宜的培养基 添加血清 （胎牛血清） (能促进细胞的生长、增殖和贴附) 以滋养细胞支持生长（经射线照射的小鼠成纤维细胞） 激素刺激（胰岛素等） 使用CO2培养箱，调节PH 群体细胞 单细胞 无限细胞系、转化或肿瘤细胞 原代细胞、有限细胞系 6、细胞克隆的主要用途： 从普通细胞系中分离出缺乏特殊基因的突变细胞系。 用于研究细胞的遗传规律和生理特性。 离体动物细胞的生长特性： （1）贴壁生长： 悬浮液中分散的细胞紧贴培养瓶内壁才能生长。 （2）接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就