HPLC-NMR在线联用系统及其应用.ppt

通常与HPLC联用的技术 常用的分析手段： HPLC-RI: 通用型检测器，灵敏度差，不适合梯度洗脱 HPLC-ELSD：通用型检测器，灵敏度差，不能提供结构信息 HPLC-UV ： 　　　 ①对不具有发色基团的有机化合物响应差 　　　 ②提供的化学结构信息远不够丰富 HPLC-MS ： 　　　① 由于离子化问题,对部分化学成分的响应差,不能分析所有结构类型的化合物; 　　　②对色谱流动相的组成有限制,不宜使用非挥发性缓冲盐; 　　　③所提供的化学结构信息尚不足以彻底解决化合物的鉴定问题,尤其对阐明基团连接位置和立体构型等缺乏证据。 HPLC-NMR HPLC-NMR NMR的优势： 高度的通用性 不破坏样品 最强大的结构解析能力 LC与NMR 直接联用的设想始于70 年代， 90 年代后期逐渐发展成熟。 离线接口和连续流动接口 灵敏度 溶剂抑制技术 由于常用的MeOH-H2O和MeCN-H2O体系在NMR中有很强的响应值，可能掩盖分析对象，因此必须采取一些方法来抑制溶剂干扰。 采用氘代溶剂　　　　　　　　价格昂贵－－适合于μHPLC 通过不同频率通道进行多重溶剂峰预饱和 脉冲梯度场的相位离散而消除溶剂干扰 常见HPLC-NMR的示意图 LC-NMR 的基本操作模式 连续流动模式(on-flow) 停流模式(stop-flow) 峰存贮模式(peak parking or loop-collection) 停流模式流程 峰存贮模式 应用领域 药物杂质鉴定 环境样品 聚合物产物 药物体内外代谢产物的结构鉴定 组合化学合成产物分析 天然产物研究 维生素E异构体分离图RP-HPLC-1H-NMR on-flow method 组合肽库的分离检测 Analysis of an unstable derivative HPLC-UV-NMR-MS平台 Analysis of Hypericum perforatum L. with HPLC-NMR-MS RP-HPLC combined withon-line DAD, FT-IR and 1H-NMR and TOF-MS: Application to a mixture ofnonsteroidal anti-inflammatory drugs HPLC-NMR在线联用系统在复杂体系分离检测中表现出了强大的生命力，以后必然能够得到更广泛的应用。 The end 　 Thanks! * * Seminar Ⅰ HPLC-NMR在线联用系统及其应用 学生：张洁 导师：张玉奎 Flow cell: U-shaped, 2-4mm i.d.,30-200ul 提高灵敏度的方法： 利用SPE等方法浓缩样品 提高磁场强度　（９００MHz NMR已经商品化） 降低探头温度　（商品化的低温探头） 优点：一次分析可得到所有组分的NMR 信息 缺点：所获得的NMR 图谱质量较差 优点：NMR谱图质量较好 缺点：存在明显的峰展宽，而且分析时间较长 色谱峰被收集并暂时贮存到不同的毛细管回路内,由NMR 谱仪逐一测定各流分。 色谱峰切割 固定时间间隔 目标峰 流动探头 NMR system 峰强度，保留时间 优化后NMR参数 NMR试验： A 完成计算机匀场 B 优化溶剂峰抑制 C 调节接收增益 D 采一维谱 E 按信噪比阀值终止采样 F 如果需要，进一步采样(二维) Journal of Chromatography B, 748 (2000) 233–258 600 MHz H NMR . The labels at the right hand side denote the classes of tripeptide, A2M refers to the three compounds: A–A–M–NH2 , A–M–A–NH2 , M–A–A–NH2. 丙胺酸(A) 蛋氨酸(M) 酪氨酸(Y) Mag. Reson. Chem. 33 (1995) 857. Phytochem. Anal. 14 (2003) 73 利用这种联用装置，Hansen等人鉴定出了该萃取物中的所有已报道的化合物，而且得到了两种新的化合物。 Anal. Chem.1999, 71,5235-5241 Anal. Chem.2000, 72,3922-3926 Flurbiprofen Ibuprofen Indomethacin Naproxen