分离分析考题及答案.docVIP

现代分离分析复习题 一、试述萃取剂的选择原则 （1）对被萃物有较高的分配比（2）萃取剂对被萃物的选择性要好（3）萃取剂对后面的分析测定没有影响（4）萃取剂应毒性小，容易制备（5）萃取剂应具有至少一个萃取功能团 二、.当对动物蛋白质进行沉淀处理时，可能采用盐析、有机溶剂沉淀、等电点沉淀和选择性热变性沉淀等方法，请对其原理和适用性进行比较。 1、盐析原理 （1）盐离子与蛋白质分子争夺水分子，降低了用于溶解蛋白质的有效水量，减弱了蛋白质的水合程度，破坏了蛋白质表面的水化膜，导致蛋白质溶解度下降。 （2）盐离子电荷的中和作用，使白质溶解度下降。 （3）盐离子引起原本在蛋白质分子周围有序排列的水分子的极化，使水活度降低，导致蛋白质溶解度下降。 盐析适用于蛋白质、酶、多肽、多糖、核酸等物质的分离纯化。（适用于一般蛋白质的分离纯化） 2、有机溶剂沉淀原理 （1）在蛋白质溶液中加入与水互溶的极性有机溶剂，降低水的介电常数，使蛋白质分子表面可解离基团的离子化程度减弱，水化程度降低，促进了蛋白质分子的聚集沉淀。 （2）是极性有机溶剂与蛋白质争夺水化水，而使蛋白质分子沉淀。 有机溶剂沉淀适用于蛋白质、酶、多糖、核酸等物质的提取。（分子质量较大的蛋白质） 3、等电点沉淀原理 蛋白质在PH为其等电点的溶液中，以双极离子存在，总净电荷为零,颗粒无电荷间的排斥作用,易凝集成大颗粒，因而最不稳定，溶解度最小，易沉淀析出。 等电点沉淀法适用于疏水性较大的蛋白质（如酪蛋白），而对于亲水性很强的蛋白质（如明胶），由于在水中溶解度较大，在等电点的PH下不易产生沉淀。 4、选择性热变性沉淀原理 选择变性沉析法原理是利用蛋白质、酶与核酸等生物大分子对某些物理或化学因素敏 感性不同，而有选择地使之变性沉析，以达到目的物与杂蛋白的分离。 选择性热变性沉淀法分离纯化热稳定性高的目标产物。 三、什么是协萃体系？为什么协同效应会显著提高萃取效率？试举例说明 1、协萃体系 （1）混合萃取剂同时萃取某一物质时，其分配比显著大于相同浓度下各单一萃取剂分配比之和，这一混合体系称协萃体系。（2）由于两种萃取剂同时使用，使萃取效率比单独使用时大为提高的现象程协同效应，这种萃取体系称协萃体系。（3）两种或两种以上萃取剂的混合物同时萃取某物质时，其分配比显著地大于每一种萃取剂在相同浓度条件下单独萃取的分配比之和，这一混合体系称协萃体系。 2、提高萃取效率：（1）生成了更为稳定的含有两种以上配位体的可萃物；(2)生成的配合物疏水性更强，更易进入有机相中。 3、举例：钒与N—羟基—N，N＇—二芳基苯甲脒络合，如果体系中有对甲氧基苯甲醛存在，形成绿蓝色的三元络合物，较易萃取。 四、什么是正向层析？什么是反向层析？ （1）固定相为极性基团，流动相为非极性或极性较小的溶剂固定相为非极性基团流动相用强极性溶剂