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- 2018-05-20 发布于福建
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一、基因工程的基本操作程序
目的基因的获取→基因表达载体的构建→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定。
二、目的基因的获取
1.目的基因
主要是编码蛋白质的结构基因,也可以是一些具有调控作用的因子。
2.获取目的基因的依据
基因的核苷酸序列,基因的功能,基因在染色体上的位置,基因的转录产物mRNA,基因的表达产物蛋白质。
3.目的基因的获取方法
(1)从基因文库中获取目的基因
基因文库含义:将含有某种生物不同基因的许多 DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库。
基因文库种类
(2)利用PCR技术扩增目的基因
PCR技术全称是多聚酶链式反应,是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。
原理:DNA双链复制。
扩增过程
变性:目的基因DNA受热变性后解链为单链
↓
复性:引物与单链相应互补序列结合
↓
延伸:在DNA聚合酶作用下延伸子链
(3)人工合成法:适于合成基因较小,且核苷酸序列已知的目的基因。
三、基因表达载体的构建——基因工程的核心
1.基因表达载体的组成
(1)目的基因。
(2)启动子
(3)终止子
(4)标记基因:鉴别受体细胞中是否含有目的基因。
2.基因表达载体的功能
(1)使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代。
(2)使目的基因能够表达和发挥作用。
四、将目的基因导入受体细胞
1.
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