产品无菌方法验证SOP.docVIP

目 录 目的 适用范围 职责 仪器设备和试剂 操作步骤 结果解释 结果记录及报告 结果报告 参考文献 10.0其他 1.0目的 对×××无菌产品的无菌试验方法进行验证，并实施产品无菌试验,确认产品是否无菌. 2.0适用范围 适用于×××公司的×××无菌产品. 3.0职责 3.1由×××公司提供无菌试验所需的样品,提供所有试验需要的仪器设备和试剂,并负责对仪器设备进行校正. 3.2由×××生物技术有限公司负责提供产品无菌试验方案,实施产品的无菌试验及其培养，并确认产品是否无菌.任何与方案有变化的都应提早通知×××公司负责人. 4.0仪器设备和试剂 4.1仪器设备 4.1.1电子天平1台(量程100～1000g, 精度0.1g) 4.1.2磁力搅拌器1台 4.1.3分注器1台 4.1.4高压蒸汽灭菌器 1台 4.1.5恒温培养箱1台 4.1.5低温恒温培养箱1台 4.2试剂 4.2.1液体硫乙醇酸盐培养基1瓶(TGC) 4.2.2胰酪胨大豆蛋白液体培养基1瓶(TSB) 4.2.3胰酪胨大豆蛋白琼脂培养基1瓶(TSA) 4.2.4无菌生理盐水1瓶 4.2.5杭州微球公司生产的培养基灵敏度指示剂，金黄色葡萄球菌[ATCC 6538] 4.2.6杭州微球公司生产的培养基灵敏度指示剂，铜绿假单胞菌[ATCC 9027] 4.2.7杭州微球公司生产的培养基灵敏度指示剂，枯草芽孢杆菌[ATCC 6633] 4.2.8杭州微球公司生产的培养基灵敏度指示剂，白色念珠菌[ATCC 10231] 4.2.9杭州微球公司生产的培养基灵敏度指示剂，黑曲霉[ATCC 16404] 4.2.10杭州微球公司生产的培养基灵敏度指示剂，生孢梭菌[ATCC 11437] 4.2.11杭州微球公司生产的培养基灵敏度指示剂，大肠埃希菌[ATCC 8739] 4.3其它 4.3.1三角瓶2个（1L ） 4.3.2三角烧杯50个（250ml） 4.3.3量筒1个(100ml) 4.3.4 试管25支(15mL) 4.3.5剪刀2把 4.3.6长镊子3把 4.3.7记号笔1支 4.3.8称量纸1包 4.3.9打火机1个 4.3.10铝箔1盒 4.3.11过氧乙酸消毒液1瓶 4.3.12一次性PE手套1包 4.3.13无菌洁净服2套 4.3.14酒精灯1盏 4.3.15无菌平皿20个(φ9mm) 4.3.16无菌漏斗(含无菌棉花) 5.0操作步骤 5.1取样 取三个批号的产品各10套,其中细菌无菌试验5套,真菌无菌试验5套.另取10套,其中6套作为试验方法验证用,剩余4套备用. 5.2试剂配制 5.2.1培养基配制 5.2.1.1 TGC培养基 根据试验需要,按每3gTGC培养基粉末加100ml蒸馏水的比例溶于于三角烧瓶后，然后人工倒入150ml培养基于三角烧杯中，用铝箔盖上.然后将其放进高压蒸汽灭菌器，于121℃进行15分钟灭菌.冷却后将其保存在30～35℃的恒温培养箱中24小时以上，在确认无菌后，供试验使用.每个三角烧杯的培养基量应确保接种产品的体积不大于培养基体积的10%. 5.2.1.2 TSB培养基 根据试验需要,按每3gTSB培养基粉末加100ml蒸馏水的比例溶于于三角烧瓶后，然后人工倒入150ml培养基于三角烧杯中，用铝箔盖上.其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基粉红色层(氧化层)不超过培养基深度的1/2.然后将其放入高压蒸汽灭菌器，于121℃进行15分钟灭菌.冷却后将其保存在30～35℃的恒温箱中24小时以上，在确认无菌后供试验用,并确定培养基粉红色层的高度不超过培养基深度的1/5,否则需100加热不超过20min使粉红色消失. 每个三角烧杯的培养基量应确保接种产品的体积不大于培养基体积的10%. 5.2.1.3 TSA培养基 根据试验需要,按每4gTSA培养基粉末加100ml蒸馏水的比例溶于于三角烧瓶后，取3mLTSA培养基到15mL的试管内,盖上试管盖,共制备5支.剩余的在用铝箔盖上.然后将其放入高压蒸汽灭菌器，于121℃进行15分钟灭菌. 在其凝固之前将其保存在50℃的恒温箱中供试验用.在其凝固之前将5支有TSA的试管斜放,使TSA培养基在试管内形成斜面,冷却后凝固后将其保存在30～35℃的恒温箱中24小时以上，在确认无菌后供试验用. 5.3培养基灵敏度试验 5.3.1培养基灵敏度指示剂的稀释 按照培养基灵敏度指示剂说明书稀释使用. 5.3.2接种试验微生物 无菌操作按下表分别接种0.1mL到装有相应