实验五红细胞计数、Hb测定.pptVIP

实验五  一、红细胞显微镜计数二、血红蛋白测定 一、红细胞计数 红细胞计数 指测定单位体积血液中红细胞的数量。 显微镜计数法 血细胞分析仪法 （三）红细胞计数方法 红细胞计数 指测定单位体积血液中红细胞的数量。 显微镜计数法（本节主要学习） 血细胞分析仪法 1.红细胞显微镜计数法 用等渗稀释液将血液稀释一定的倍数后，滴入计数板，在显微镜下计数一定范围内红细胞数，经换算可求得每升血液中的红细胞数。 红细胞稀释液 Hayem液 枸橼酸钠稀释液 普通生理盐水或加1%甲醛的生理盐水 ①Hayem液 主要成分及作用： NaCl 调节渗透压； Na2SO4 调节渗透压，提高比重防止细胞粘连； HgCl2 防腐； 蒸馏水 缺点：遇高球蛋白血症患者，由于蛋白质沉淀而使红细胞易凝集。 ②枸橼酸钠稀释液 主要成分及作用： NaCl 调节渗透压； 枸橼酸钠 调节渗透压，抗凝； 甲醛 防腐； 蒸馏水 优点：配制简单，可使红细胞在稀释后较长时间保持正常形态并且不凝集，故应用较广。 ③普通生理盐水或加1%甲醛的生理盐水 急时用。 参考值 白细胞的影响 一般情况下，实际影响较小，可忽略不计； 白细胞过高者（WBC＞100×109/L），应校正。 实际红细胞数=RBC－WBC； 高倍镜下注意识别，计数时勿将白细胞计入。 二、血红蛋白测定 血红蛋白组成 4条珠蛋白肽链 4个亚铁血红素分子 按不带氧计算，血红蛋白分子量为64458。 亚铁血红素 无种属特异性； 由Fe2+和原卟啉组成； 铁原子位于卟啉环中央，具有6条配位键； 其中4条与原卟啉中心的4个吡咯环氮原子连接； 另2条配位键与血红素分子平面垂直，分别与平面两侧的配体（ 1个珠蛋白肽链，1个O2）连接。 血红蛋白及其衍生物 氧合Hb（Hb02）：呈鲜红色； 还原Hb（Hbred）：呈暗红色； 碳氧Hb（HbCO）：呈樱桃红色； 高铁Hb（Hi）：呈红褐色； 氰化高铁Hb（HiCN）：呈棕红色，540nm处有一较宽吸收峰。 血红蛋白测定方法及评价 血红蛋白测定，即测定血液中各种血红蛋白的总浓度。 氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法 十二烷基月桂酰硫酸钠血红蛋白 （SLS-Hb）测定法 碱羟血红蛋白（AHD575）测定法 叠氮血红蛋白（HiN3）测定法 溴代十六烷基三甲胺（CTAB）血红蛋白测定法 血细胞分析仪法 （三）血红蛋白测定方法及评价 血红蛋白测定，即测定血液中各种血红蛋白的总浓度。 氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法 十二烷基月桂酰硫酸钠血红蛋白 （SLS-Hb）测定法 碱羟血红蛋白（AHD575）测定法 叠氮血红蛋白（HiN3）测定法 溴代十六烷基三甲胺（CTAB）血红蛋白测定法 血细胞分析仪法 氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法 ⑴原理 血液在血红蛋白转化液中溶血后，除SHb外各种血红蛋白均可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白（Hi）， Hi再与试剂中CN-结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白（HiCN）。 HiCN在540nm处有一吸收峰。根据标本的吸光度，即可求得血红蛋白的浓度。 转化液 1983年全国临床检验方法学学术会议推荐采用文齐氏液。 组成及作用: K3Fe(CN)6 氧化作用 KCN 提供CN－离子 KH2PO4 缓冲液 非离子表面活性剂 破坏红细胞，防止混浊 特点 pH7.2±0.2，Hb转化快，5min即可完成，非离子表面活性剂可防止试剂混浊。 ⑶计算公式 ⑷优缺点 优点 ICSH和WHO推荐的参考方法； 操作简便、结果稳定可靠； 除SHb外其它Hb衍生物均可检测； 读取吸光度后可直接定值。 缺点 试剂中含剧毒药氰化钾； 不能测定SHb，对HbCO转化较慢； 遇高球蛋白或高白细胞血症试剂易混浊。 废液处理 参考区间 临床意义 RBC和Hb增多 成年男性RBC＞6.0×1012/L,Hb＞170g/L 成年女性RBC＞5.5×1012/L,Hb＞160g/L RBC和Hb减少 红细胞和血红蛋白低于参考值的下限，为红细胞和血红蛋白减少，通常称贫血。 作业 红细胞计数时如遇WBC过高，应如何校正？ 血红蛋白测定的原理、步骤、参考值、临床意义及注意事项？ * * 4.0～5.5 成年男性 6.0～7.0 新生儿 3.5～5.0 成年女性 红细胞数（×1012/L） 目前常用方法 Hb(g/L)= A 44 × 1000 64458 ×251 =A×367.7 A为测定管吸光度 44为毫