新生儿乙型肝炎宫内感染与胎盘Hofbauer细胞的关系.doc

新生儿乙型肝炎宫内感染与胎盘Hofbauer细胞的关系 【摘要】目的探讨胎盘Hofbauer细胞在乙型肝炎母婴垂直传播中的作用。方法采用免疫组织化学的方法对120例孕妇及其所产120例新生儿血清HBsAg进行检测并分为垂直传播组(母亲及新生儿HBsAg均为阳性)9例、非垂直传播组(母亲HBsAg阳性,新生儿HBsAg阴性)91例和正常对照组(母亲及新生儿HBsAg均为阴性)20例。结果垂直传播组胎盘HbsAg阳性率为100.0%；非垂直传播组和正常对照组分别为37.36%和0.00%,差异具有统计学意义(P＜0.05)。垂直传播组带有棕黄色阳性信号的Hofbauer细胞分布于胎盘间质中，其个体较大、形状不规则，胞核呈卵圆形，胞浆较多，阳性信号多位于胞质和胞膜而未见于胞核，而非垂直传播组和正常对照组的胎盘中,Hofbauer细胞非常少。结论提示Hofbauer细胞在HBV经胎盘母婴垂直传播中可能具有重要作用。 【关键词】 乙型肝炎；胎盘；Hofbauer细胞；垂直传播；免疫组化 胎盘Hofbauer细胞是存在胎盘绒毛间质中的胎儿巨噬细胞,为胎盘的重要免疫细胞,具有游走和抗原提呈的特性,可对外来抗原(细菌和病毒等)进行吞噬、加工和提呈［1］。本试验观察胎盘组织Hofbauer细胞感染HBV和胎儿感染的关系,旨在阐明胎儿感染HBV的机制。 1 资料与方法 1.1 一般资料 选择2005年1月至2007年1月就诊于石家庄市第五人民医院和河北医科大学第二医院产科的HBsAg阳性孕妇及其所生新生儿100例和HBsAg阴性孕妇及其所生新生儿20例为研究对象,排除溶血肝酶升高,血小板综合征,中毒妊娠高血压综合征等并发症，经实验室检查孕妇及新生儿血清HBsAg。孕妇平均年龄(26.6±2.9)岁；孕周38～41周；新生儿平均体重(3 025±759)g,其中男婴65例,女婴55例,无畸形儿。 1.2 方法 血清检测：采集孕妇肘静脉血5 ml，胎儿娩出24 h内股静脉血2 ml，1 500 r/min离心分离血清，20℃保存备用。新生儿采血后常规注射乙肝免疫球蛋白和乙肝疫苗。测定均采用酶联免疫吸附试验(ELISA，上海科华)，结果检测全在自动酶联检测仪(MultiskanMK3)上进行。检测步骤：吸取血清原液50 mu;l 加入酶联反应板中，同时滴加辣根过氧化物酶标记的抗体，37℃孵育反应30 min后,洗液清洗5遍；加入显色剂A和B，37℃孵育10 min，加终止液终止反应，分别于450 nm和630 nm处进行双波长检测，读吸光度(A)值，P/Nge;21为阳性，乙肝五项检测试剂盒购于上海科华生物技术公司。胎盘免疫组织化学和病理学检测：胎盘娩出0.5 h内取1 cmtimes;1 cm大小，0%甲醛固定，全层脱水，常规石蜡包埋，连续切片，厚4 mu;ｍ，进行HBsAg的免疫组织化学(SP法，小鼠抗HBsAg及SP试剂盒、DAB显色剂均由福建迈新公司提供)。结果判定以Hofbauer细胞胞浆或细胞周围棕黄色为阳性染色，每张切片选择5个高倍视野，计数不少于500个细胞，取均数并评分：不着色为0分，着色淡为1分，着色深为2分；着色细胞占计数细胞百分率：le;5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，ge;51%为3分，染色程度与染色细胞百分率得分乘积为最后得分。0～1分为阴性病例，2分以上为阳性病例。宫内感染阳性标准：新生儿出生24 h内未接受主被动联合免疫前静脉血HBsAg阳性。 1.3 统计学分析 采用SAS 8.0软件，计数资料以率表示，采用chi;2检验，P0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 新生儿宫内感染 检出率为7.50%(9/120)，其中垂直传播(母亲及新生儿HBsAg均为阳性)9例，非垂直传播(母亲HBsAg 阳性,新生儿HBsAg阴性)91例和正常对照者(母亲及新生儿HBsAg均为阴性)20例。 2.2 胎盘HBsAg的免疫组织化学 胎盘组织中的HBsAg呈现棕黄色信号，垂直传播9例全部胎盘均检测出HBsAg阳性,阳性率为100.00%；非垂直传播91例胎盘检测出HBsAg阳性34例，阳性率为37.36%,差异有统计学意义(P0.05)；正常对照者胎盘未检出HBsAg。棕黄色的阳性信号出现在胎盘滋养细胞层的滋养细胞、间质层的Hofbauer细胞和血管内皮细胞胞质。 3 讨论 HBV感染是一个世界性的公共卫生问题,据估计全球至少有20亿人曾感染过乙型肝炎病毒HBV［2］,约有3.5亿人感染了慢性乙肝,每年约有100万慢性乙肝患者死亡［3］。我国是HBV感染的高发区,HBsAg检出率约为10%,长期携带病毒易发展为肝硬化及肝癌,严重威胁人民的健康。母婴传播是我国乙肝高发的一个重要因素,也是慢性乙肝病毒感