血片染色与原虫镜检-1课件.pptVIP

疟原虫镜验技术 四川省疾病预防控制中心寄防所 康杨 疟原虫的生活史 2个阶段：人体内发育阶段（无性分裂） 蚊体内阶段（有性生殖） 2个宿主: 中间宿主--人 终末宿主—按蚊 2个时期: 红细胞外期（肝细胞内期） 红细胞内期。 裂体增殖周期: 间日疟、卵形疟48小时； 三日疟72小时；恶性疟36-48小时。 ●分子生物学、血清学技术发展迅猛,但是确诊疟疾的“金标准” 仍然是血液显微镜检查 ●显微镜检查是唯一可鉴别4种疟原虫的方法 ●厚薄血涂片的检查仍被认为是不可替代的疟疾诊断的金标准 厚薄血膜的制作 取血部位和血量 采血部位和取血方法：耳垂或无名指（婴儿足跟或脚趾），通常在耳垂取血，先用75%酒精棉球消毒取血部位，待酒精干后，用左手拇指和食指紧捏耳垂上方或无名指指尖，右手持消毒针迅速刺入皮肤，不宜过深或过浅。然后用右手中指轻轻挤压出血。厚血膜血量约一粒米大小。 标准的疟疾厚薄血膜片位置 厚薄血膜的标准 ●厚血膜血量适宜，不宜过多或过少 ●薄血膜平整,无皱折和空泡.红细胞单层排列 血膜的制作 血膜编号 血膜制成后，立即用特种蜡笔或水笔于玻片面上写上受检者的号码，以防差错，待薄血膜干后再用铅笔于薄血膜中写上血片种类的代号和受检者的个人编号，依次顺序插入标本盒内。 制作血膜的注意事项 1. 玻片清洗时，避免玻片碰撞、磨损。制作血膜的载玻片必须完全清洁而毫无油渍或污垢。制片时，手指只能持载片的边缘，不能接触玻片表面，以免油污使薄血膜产生空白区以及厚血膜脱落。作为推片的玻片边缘一定要平滑，才能使推出的血膜均匀一致。 制作血膜的注意事项 2. 刚涂制的血膜要平放在标本盒内，厚血膜未干前勿使标本盒倾斜，以免血膜倾向一侧，造成血膜厚薄不均，厚处不一溶血和着色而影响检查结果；晾干血膜时应注意防尘、防止苍蝇、蟑螂等昆虫吮吸血膜，干后应及时装入标本盒并盖严，新的木制标本盒需敞开放置一段时间，让木醇挥发后才能使用，以免厚血膜红蛋白被其固定，不能溶血或染色效果不佳。 制作血膜的注意事项 3. 血膜让其自然干燥，切忌用太阳晒或火烤，干透后才能用甲醇固定薄血膜。夏天标本尽可能24~48小时内固定染色；冬天也不能超过72小时。放置时间越久，厚血膜越不易脱血，染色效果也差。若不能及时染色，薄血膜宜先用甲醇固定（1~3分钟）然后用过滤清水对厚血膜溶血，晾干固定后装入盒内盖严，待以后染色。 染色过程 将血片平置于染色板上。 用吸管吸取已稀释的吉氏液约2ml于厚薄血 膜上，染色20~40 min。 用清水细缓冲去染液。 置玻片于插板上，自然晾干。 血片染色 （一）染液的种类 染液种类： 对镜检疟原虫染色虽然种类名称很多，但都是从罗门诺夫斯基氏创造的多色性染液变化过来的。 多色性染液可分为水溶液和醇溶液两类。水溶液类有罗氏（Romanowsky）染液、费氏(Field)染液等；醇溶液有吉氏（Giemsa）染液、瑞氏（Wright）染液等。 （一）染液的种类 水溶液类: 罗氏（Romanowsky’s）染剂早在1891年由罗门诺夫斯基发明。还有费氏（Field’s）和J.S.B（Jaswanant Singh Bhattacharji）染剂。均为分成甲、乙两种染液的复式染剂。 （一）染液的种类 醇溶液类: 有吉氏（Giemsa）染液、瑞氏（Wright）染液等。是在水溶液染液的基础上改进发展而成。目前我们推荐的是运用醇溶液类中的吉氏（Giemsa）染液 （三）吉氏染液母液配置方法 取吉氏粉0.5克置于研钵中，加少量甘油充分研磨，再加再磨，至25毫升加完为止，倒入60或100毫升带有玻塞的有色玻瓶中。在研钵中加少量甲醇，洗去甘油浓液混入瓶内，至25毫升甲醇洗净钵中甘油染液为止，塞紧瓶塞，充分摇匀，置于55~60℃水浴中或温箱内24小时或室温内3~5天，多加摇动，即成原液。吉氏染液是目前较优良的血膜染剂，即使在炎热天气中，亦可经久不变。 稀释吉氏原液 ●原液需经pH7.2磷酸盐缓冲液（PBS）或净水稀释后，方可用于厚薄血片染色。 ●吸取母液时，不要晃动瓶子,以免沉淀物泛起影响染色效果. （三）吉氏染液血片染色方法 先用甲醇或无水酒精固定薄血膜，待干后进行染色。亦可在固定薄血膜后用清水对厚血膜溶脱血红蛋白，然后才进行染色。 成批血片染色：将已固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入2%吉氏染液稀释液（2毫升原液加中性蒸馏水98毫升稀释均匀即成），同时对厚薄血膜染色30分钟