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2006－07 * 薄膜过滤法8种供试品的处理和接种 ⑥无菌气（喷）雾剂供试品 取规定量，将样品容器置冰室冷冻约1小时。速以无菌手续在容器上钻一小孔，释放抛射剂后再无菌开启容器，按水溶性制剂或非水溶性制剂项下方法检验。 第31页/共50页 2006－07 * 薄膜过滤法8种供试品的处理和接种 ⑦装有药物的注射器 取规定量，装上无菌针头（非包装中所配带的），吸入稀释液或标签所示的溶剂溶解，按水溶性制剂或非水溶性制剂项下方法操作。同时应做包装中所配带的无菌针头的无菌检查。 ⑧具有导管的医疗器具（输血、输液袋等） 取规定量，用冲洗液50ml/袋分别冲洗内壁，集中冲洗液于适宜的无菌容器中，薄膜过滤。同时应做包装中所配带的针头的无菌检查。 第32页/共50页 2006－07 * 无菌检查对照试验 阳性对照 ：应根据供试品特性选择阳性对照菌。 无抑菌作用及抗革兰阳性菌为主的供试品，以金黄色葡萄球菌为对照菌； 抗革兰阴性菌为主的供试品以大肠埃希菌为对照菌； 抗厌氧菌的供试品，以生孢梭菌为对照菌； 抗真菌的供试品，以白色念珠菌为对照菌。 阴性对照 ：供试品无菌检查时，应取相应溶剂和稀释剂同法操作，作为阴性对照。 第33页/共50页 2006－07 * 培养及观察 上述含培养基的容器按规定的温度培养14天。 培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。 如在加入供试品后、或在培养过程中，培养基出现浑浊，培养14天后，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中或划线接种于斜面培养基上，细菌培养2日、真菌培养3日，观察是否再出现浑浊或斜面有无菌生长；或取培养液涂片，染色，镜检，判断是否有菌。 第34页/共50页 2006－07 * 结果判断 以一次检出为准。 若供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合规定； 若供试品管中任何1管显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定，除非有证据充分证明检出的微生物非供试品本身所致，原检验结果无效，应重试。 第35页/共50页 2006－07 * 结果判断 当符合下列至少一个条件时，方可判试验结果无效： ⑴ 无菌检查试验所用的设备及环境的微生物监控结果不符合无菌检查法的要求。 ⑵ 回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的因素。 ⑶ 阴性对照管有菌生长。 ⑷ 供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌试验中所使用的物品和（或）无菌操作技术不当引起的。 第36页/共50页 2006－07 * 2005年版药典无菌检查方法的验证 第37页/共50页 2006－07 * 2005年版药典无菌检查方法的验证 验证的目的: 确认所采用的方法适合于供试品的无菌检查。即确认供试品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性已被充分消除到可以忽略不计。 验证的意义：保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。 第38页/共50页 2006－07 * 验证的类型 前验证: 建立药品的无菌检查法 再验证: 修订检验方法;供试品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时 ;定期的方法验证. 第39页/共50页 2006－07 * 无菌检查方法的验证 菌种及菌液制备：同培养基灵敏度检查。 验证方法：同供试品测定，分为薄膜过滤法和直接接种法。 无菌检查采用的方法必须与验证方法一致 第40页/共50页 2006－07 * 2005年版药典无菌检查方法的验证 薄膜过滤法 将规定量的供试品按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入小于100 cfu的试验菌。取出滤膜接种至相应的培养基中，或将培养基加至滤筒内。取一支装有同体积培养基的容器，加入等量的试验菌，作为阳性对照，按规定温度培养3～5天。各试验菌同法操作。 第41页/共50页 2006－07 * 直接接种法 取符合直接接种法培养基用量要求的硫乙醇酸盐流体培养基8支，分别接入金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌的菌悬液1ml(含菌小于100 cfu)各两管；取符合直接接种法培养基用量要求的改良马丁培养基4管，分别接入白色念珠菌、黑曲霉菌的菌悬液1ml(含菌小于100 cfu)各两管。其中1管接入规定量的供试品，另1管作为阳性对照，按规定的温度培养3～5天。 2005年版药典无菌检查方法的验证 第42页/共50页 2006－07 * 与阳性对照比较，如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，则供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用，可按此法进行供试品的无菌检查。如含供试品的任一容器中微生物生长微弱、缓慢或不生长，则供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用