[园林植物育种学课件]-第9章 植物组织培养技术知识及其在育种中的应用.ppt

第九章 植物组织培养技术及其在育种中的应用;一、 现代生物技术及其基本概念;（二）生物技术的种类;（三）细胞工程;（四）克隆概念;3、植物组织培养的特点 培育材料经济； 培养条件可人为控制； 生长周期短，繁殖率高； 管理方便，利于自动化控制。 ;5、植物组织培养的基本操作 无菌操作技术 细胞培养技术 原生质体融合技术;接种用具的灭菌 接种前，必须把用具放入接种室或箱内，初用接种室或箱时要用甲醛（一般市售分析纯的有效成份为 36-38% 熏蒸5小时以上再开紫外光灯照射40-60分钟，以后在每次接种之前，把要接种的试管或三角瓶放入接种室（箱）内，用5%的煤酚瓶皂溶液即来苏尔（一般市售的有效成份为47-53%）或 5% 的石灰炭酸液喷雾消毒，再打开紫外光灯照20-40分钟，这样消毒后，再经30-40分钟便可进行接种。 ;接种材料的表面灭菌 接种前花蕾或穗的彻底灭菌是杜绝污染的主要关键，先用70-75%的酒精浸泡10-15秒钟或用酒精棉球擦两遍，初步杀死表面所带的微生物，放在10%的漂白粉液或饱和漂白粉液中浸泡15-30分钟杀菌，然后用无菌水冲洗2-3次。 消毒过的穗子或花蕾用消毒纱布包好，待取花药接种，注意，穗子或花蕾的操作要在无菌条件下进行。;5、植物组织培养所需营养与环境条件 （1）无机营养 大量元素： 一般是指浓度大于0.5mmol/L.氮(N) 、磷(P) 、钾(K) 、钙(Ca) 、镁(Mg) 、硫(S) 。 微量元素： 包括铁(Fe) 、铜(Cu) 、钼(Mo) 、锌(Zn) 、钠(Na) 、锰(Mn) 、钴(Co) 、硼(B) 、碘(I)。 （2）有机营养 维生素、肌醇、氨基酸、有机添加物。 （3）生长调节物 生长素：2，4 - D、奈乙酸(NAA)、吲哚丁酸（IBA）、吲哚乙酸(IAA) 。 细胞分裂素：激动素（KT）、6-苄基氨基嘌呤（6BA） 、玉米素（ZT）。 赤霉素（GA） ：脱落酸（ABA） 、乙烯利（CEDP）。;（4）琼脂 （5）能源和渗透压 （6）其他成分 （7）温度 （8）光照（光强、光质）;6、植物组织培养经历的五个阶段： （1）预备阶段 外植体的获得； 接种材料的消毒处理； 配制适宜的培养基； （2）诱导去分化阶段 （3）继代增殖阶段 （4）生根成芽阶段 （5）移栽成活阶段;三、植物组织培养技术在育种中的应用;（一）单倍体育种;2. 单倍体植物在育种上的意义;3. 单倍体植株和愈伤组织的培养;（2）花药的接种 接种前的准备工作 接种和培养花药是在无菌条件下进行的，所用的一切用具必须彻底灭菌。 花粉发育时期的鉴定 适宜的花粉发育时期对于提高花粉诱导愈伤组织分化的频率是很重要的，为此，进行花药培养前，要用显微镜进行花粉发育时期的鉴定。 经显微镜检查后，把花粉细胞的发育进期与花药或花序的外部形态联系起来，找出花粉单核期或单核期的花蕾或花序的外部形态标志选取花药进行接种培养。 ; ;4. 染色体加倍;单倍体育种程序：材料采集 ? 接种培养 ? 诱导愈伤组织  ?获得再生植株 ? 染色体加倍 ? 幼苗培育和品种选择 ;（二）原生质体培养与体细胞杂交 常规杂交育种由于物种间难以逾越的天然屏障而举步维艰。 科学家们受细胞全能性理论及组织培养成功的启示，逐渐将眼光转向细胞融合，试图通过这种崭新的手段冲破自然界的禁锢。;;2. 原生质体的特点;3. 发展概况;4. 原生质体的制备 （1）取材与灭菌 （2）酶解 (纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶) （3）分离 （沉淀法、漂洗法、滴洗法） （4）洗涤 （5）鉴定（形态观测、活性鉴定）;5. 原生质体的融合 化学法诱导融合 按比例混合双亲原生质体- 滴加PEG- 滴加高钙高PH值溶液- 洗涤原生质体溶液- 离心获得原生质体溶液- 筛选杂种细胞- 再生杂种细胞。;物理法诱导融合 ;6. 融合细胞的培养鉴定与筛选 杂和细胞的显微镜鉴别； 互补法鉴定杂和细胞； 细胞与分子生物学法； 植株形态的鉴别。 ;;（三）人工种子 人工种子即人为制造的种子，它是一种含有植物胚状体或芽、营养成分、激素、及其他成分的人工胶囊。其具有种子的功能，可直接用于田间播种。 ; 1、人工种子的构成 人工种皮 胚 状 体 人