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血管紧张素转化酶（ACE）抑制剂对人类躯体的ACE激肽结合位点有不同的选择性。 摘要 血管紧张素转化酶（ACE）有两个自然基板和两个催化结构域：一个裂解血管紧张素I和灭火缓激肽.本研究的目的是调查两个结合位点，比较ACE抑制剂的结合亲和力与人内皮的ACE。在体外结合分析测试缓激肽的血管紧张素I能力，或不同的ACE抑制剂（依那普利拉，培哚普利，喹那普利）取代了[125I]351A的饱和浓度，一个放射性标记的莱诺普利模拟，从ACE结合位点。计算IC 50 值ACE抑制剂在纳摩尔范围。而那些对自然在微摩尔范围，缓激肽/血管紧张素I选择性双重位移实验计算比率分别为：培跺普利 1.44，雷米普利 1.16，喹那普利 1.09.ACE抑制剂普遍具有较高的亲和力比血管紧张素E结合位点激肽，支持的想法，这些药物主要是一直缓激肽降解和其次抑制剂血管紧张素II产生。Perindoprilat缓激肽与血管紧张素I的结合位点的选择性最高，和依那普利拉已经是最低的。这些结果表明，有走向缓激肽降解的网站的血管紧张素转化酶抑制剂的亲和力的差异，这可能导致心血管疾病的疗效差异。 1简介 人类体血管紧张素转化酶（ACE）是一个I型膜蛋白，是最有可能从派生重复祖先的基因。包括两个同源外催化领域（N-和C-末端域）其中每一个包含一个假定的活性部位。体细胞的ACE在人体组织和血浆内无处不在，在较短时间内发生异构体的ACE，这只是在男性睾丸内发现的只有一个活动的地方 ACE切割的各种C-末端肽，包括一缓激肽和血管紧张素I。它可以被视为酶的激肽酶II。由于其对缓激肽的作用退化，从而增加血管扩张，或如血管紧张素转化酶，由于血管紧张素I其抑制的转换到八肽血管紧张素II。 ACE抑制剂是一类调节活性的药物。因此，他们改变血管收缩之间的平衡，盐性，和血管紧张素II的肥厚性，和血管舒张和缓激肽单位尿钠排泄属性。缓激肽促进血管扩张刺激产生一氧化氮（NO）,和其它血管内皮细胞放宽因素。ACE抑制剂被广泛用于治疗心血管和肾脏疾病，和第二次冠状动脉疾病的预防。 这些代理商以前发现ACE有两个催化结构域，很少有信息相对缓激肽的行动和亲和力和血管紧张素I的两个域。这项研究的目的是比较五种不同的ACE抑制剂的亲和力（即依那普利，培哚普利，喹那普利，雷米普利和群杜普里）为在人体内皮细胞的ACE的两个结合位点在体外结合的研究。我们选择了这些特殊的ACE抑制剂因为他们是临床实践中最常使用的，也因为他们在大调查冠状动脉设置的大型国际临场试验疾病与不同的结果（优素福等人，2000年皮特等，2001年福克斯，2003年，布劳恩瓦尔德等人，2004年） 2.方法 2.1.试剂 化学，细胞培养试剂，血管紧张素I，缓激肽来自Sigma Aldrich(意大利米兰)。集资人血清由布雷西亚的输血中心医院提供。这里考察的所有的ACE抑制剂管理tered作为前体药物，在体外研究均使用活性代谢产物。这些分别来自Iris，施维雅，法国，连同赖诺普利模拟351A（在P-hydroxybenzamidine衍生的N-（1-羧基-3-phenylpro pyl）-l-赖氨酸-L-脯氨酸，这是一个具体的ACE绑定碘化赖诺普利模拟）。 2.2 内皮细胞培养 人气静脉内皮细胞（HUVES）由布雷西亚大学医院的妇产科提供脐带并用文在描述（谢蓓福，1973）。简单地说，静脉插管用Hanks洗涤缓冲液（哈弗商学院），并用0.2%胶原酶在20毫米的HEPES缓冲在37摄氏度15分钟。然后离心收集，种子在1.5%明胶涂层的细胞培养瓶中，生长在适合环境中（中199/RPMI-1640 1:1,2毫升谷氨酰胺，100u/ml青霉素，100毫克/毫升链霉素，10mM的HEPES,20%的人血液，5微克/毫升Plasmocin）空气加湿二氧化碳含量5%，试问37摄氏度。细胞进行了因子阳性表达，并通过典型的鹅卵石形态。细胞生长通过二次分离和传代用6孔板明胶包被.24H后进行前实验。 2.3 ACE抑制剂结合试验 结合实验的基础上的竞争力位移是由于每个ACE抑制剂调查，或ACE的自然基板，（血管紧张素I或缓激肽）这些分析是在整个血管内皮细胞上进行的。 2.31单一位移实验 这两个配体结合实验是同时的[125I]315A和一个单一的ACE抑制剂或基板，被定义为单一位移实验。315A的氯胺T法士放射性的。【125I】351A(具体活动2000次/毫摩尔)的结合ACE的活性部位（S）一到一的化学计量。分包的内皮细胞在6孔扳冲洗用2毫升的缓冲液（140nm氯化钠， 2.7nm氯化钾，.1.03nm 氯化钙，1.03nm 氯化镁,0.42nm磷酸氢二钠，10nmHEPES,2nm钠丙酮酸，5nm葡萄糖，PH值7.4）培养基用2.5毫升新鲜的含5%太牛血清的缓冲牛血清