负载吲哚菁绿的介孔硅纳米探针在肝癌术中精准导航方法的研究-外科学（普通外科学）专业论文.docx

硕士学位论文手术导航组的裸鼠的肿瘤残余率低，术后的生存率得到明显的改善。在2013年， 钱永健团队应用ACPPDs对于乳腺癌淋巴结转移的裸鼠进行研究，结果指出， 这种主动靶向的荧光探针可以定位乳腺癌淋巴结转移灶，并实时指导转移淋巴 结的切除。在2014年，Debadyuti Ghosh团队，应用主动靶向探针SBP．M13．SWNT 对亚毫米的卵巢癌肿瘤进行靶向诊断，并且进行了实时荧光手术导航。在临床应用方面，在2013年，Matthew B．Sturm团队应用主动靶向早期食管肿瘤的荧 光探针ASY*．FITC完成了首例人体试验，而且手术效果良好。在众多光学成像 方面，近红外荧光成像是一种特殊类型的荧光，同时也是目前光学荧光成像中 的一个重要发展趋势，与常规光学相比，近红外荧光(650 to 900 nm)受生物组 织本底的影响小，在生物组织内吸收衰减和散射小，从而具有组织中的穿透能 力强、背景噪声小和产生的信背比高。近红外荧光手术导航仪具有以上优势， 但在肿瘤诊疗应用中受制于没有理想的近红外荧光探针，所以近红外荧光成像 探针的研发一直是分子影像研究的挑战。同样的，具有肿瘤特异性靶向的近红 外荧光分子探针仍然缺乏。所以仍需要投入大量的科研来寻找更多的能够用于 近红外荧光手术导航仪的荧光分子探针。在本实验研究中，我们针对近红外荧光手术导航下，手术切除肝脏肿瘤研 究的热点问题，利用具有良好生物相容性的多介孔二氧化硅(mesoporous silical nanoparticals，MSNs)硅球材料作为分子探针的载体，用ICG作为近红外荧光染 料，并用RGD多肽进行靶向修饰后构建成能够主动靶向整合素avl33受体的近红 外荧光探针，并建立人肝癌皮下肿瘤裸鼠模型、人肝癌原位肿瘤裸鼠模型和人 乳腺癌转移性肝癌裸鼠模型，探讨靶向探针的生物适应性，主动靶向性，靶向 成像效果和术中实时荧光手术导航的应用价值。研究目的：本研究的目的是制备一种主动靶向整合素0【v133受体的近红外荧光纳米探针， 可以在术中实时的精确定位肝脏肿瘤的位置和边界，为术者在术中实时提供客 观的手术切缘参考，实现精准的荧光手术导航切下切除肿瘤。III万方数据摘要研究方法： 1．多介孔硅球的合成和观察水热合成法合成多介孔硅球，扫描电镜和透射电镜观察多介孔硅球的形貌和 大小；粒度仪检测多介孔硅球的水合粒径与粒径分布特征。 2．主动靶向探针的合成与化学表征将吲哚菁绿超声震荡上载入多介孔硅球中，聚乙二醇修饰后，加入RGD多 肽溶液制备成主动靶向0【vD3受体的近红外荧光纳米探针(ICG／MSNs．RGD)。扫 描电镜和透射电镜观察靶向探针的形貌和大小，粒度仪检测探针水合粒径与分 布；荧光分光光度计检测靶向探针及ICG的发射光谱与激发光谱。 3．探针毒性实验、体外靶向探针靶向能力的观察用MSNs和靶向探针(ICG／MSNs．RGD)孵育HepG2肝癌细胞后，再用MTT 法评估MSNs和靶向探针的毒性；将0【，p3受体高表达的MDA．MB．231．GFP乳腺 癌细胞和‰D3受体低表达的MCF．7乳腺癌细胞分别用靶向探针 (ICG／MSNs．RGD)孵育1小时，用磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffer solution，PBS) 液冲洗干净后，近红外体式荧光显微镜观察两种细胞摄取靶向探针的情况； 4．皮下肝脏肿瘤裸鼠模型，原位肝脏肿瘤裸鼠模型和乳腺癌肝转移癌裸鼠模型的 建立取20只5-6周雄性BALB／e裸鼠，取含1x101／mL HepG2．GFP细胞悬液接种 于裸鼠左腋部皮下，建立裸鼠皮下肝脏肿瘤裸鼠模型。在无菌条件下麻醉裸鼠，经剑突下5 ITlm处竖直切口开腹部暴露肝脏，沿肝 脏被膜下进针，缓慢推入509L含1 x l 01／mL HepG2．GFP或MDA—MB．23 1．GFP 细胞悬液，逐层关腹，同样方法建立10只5-6周雄性BALB／c裸鼠原位模型或 10只5-6周雌性BALB／c乳腺癌肝脏转移裸鼠模型。5．在体研究靶向探针的主动靶向功能 取8只皮下肝脏肿瘤裸鼠模型，随机分成两组(每组4只)，一组为对照组，经尾静脉注射非靶向探针(ICG／MSNs)150 gL(0．2 mg／mL)；一组为靶向探针IV万方数据硕士学位论文组，经尾静脉注射靶向探针(ICG／MSNs．RGD)1 50 gL(O．2。在注射后的， 12h ， 24h 48h 72h 96h 和 120h 用 IVIS 200探针在体分，，，布情况。其中，在24h时，每组分别取一只荷瘤裸鼠，脱颈处死，取肿瘤，心 脏，肝脏，脾脏，肾脏等重要脏器，观察探针在各重要脏器的分布情况。同时 用IVIS活体成像软件3．0分析肿瘤区域探针代谢数据并绘制曲线。 6．探针在皮下肝肿瘤边界的精准定位的应用取3只皮下肝脏