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2013.11.23 湖北省动物疫病培训 * 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌单基因缺失株的构建 3.1 基因缺失疫苗-猪传染性胸膜肺炎疫苗 技术路线 2013.11.23 湖北省动物疫病培训 * * 3.2 基因工程活载体疫苗 利用自然弱毒或人工致弱的病毒或细菌作为载体，表达其它病原的免疫原性蛋白，以此突变株制备的疫苗。 载体的主要特性是：致病力下降或缺失，基因组庞大，可容纳外源基因并大量表达。 常用的活载体有：伪狂犬病毒弱毒株，腺病毒，致弱的沙门氏菌，乳酸杆菌、胸膜肺炎放线杆菌弱毒株。 2013.11.23 湖北省动物疫病培训 * 猪霍乱沙门氏菌ΔcrpΔasd C500平衡致死系统构建原理图 技术路线 3.2 基因工程活载体疫苗 2013.11.23 湖北省动物疫病培训 * crp-缺失株生长变慢 3.2 基因工程活载体疫苗 菌株ΔasdC500、亲本菌株C500和ΔcrpΔasdC500的生长曲线 2013.11.23 湖北省动物疫病培训 * 3.2 基因工程活载体疫苗 ΔasdC500对猪的安全性试验结果 2013.11.23 湖北省动物疫病培训 * p46 蛋白是猪肺炎支原体的种特异性表面抗原； P65 蛋白是猪肺炎支原体的重要免疫原 P46、P65 western blot 验证 重组菌的生长曲线 3.2 基因工程活载体疫苗-表达肺炎支原体免疫蛋白重组沙门氏菌 2013.11.23 湖北省动物疫病培训 * 3.2 基因工程活载体疫苗 动物试验设计 2013.11.23 湖北省动物疫病培训 * 3.2 基因工程活载体疫苗 各组猪肺炎支原体抗体动态变化 各组γ干扰素动态变化 各组白细胞介素-4 动态变化 2013.11.23 湖北省动物疫病培训 * 3.2 基因工程活载体疫苗 肺 MP Ab、IFN-γ 和 IL-4 的检测结果 脾淋巴细胞 IFN-γ 和 IL-4 检测结果 基因工程疫苗活疫苗载体种类 2013.11.23 * 湖北省动物疫病培训 基因工程疫苗的管理 按照农业转基因生物安全管理办法实施，申报不同的安全性评价阶段 实验室研究 中间试验 环境释放 安全生产 临床试验 申报新兽药注册证书 2013.11.23 湖北省动物疫病培训 * 2013.11.23 湖北省动物疫病培训 * 基因工程疫苗使用现状 目前，我国已经批准上市的基因工程疫苗： 猪伪狂犬病基因缺失疫苗 口蹄疫基因工程疫苗 猪大肠杆菌K88-K99基因工程疫苗 猪传染性胸膜肺炎弱毒疫苗（申报中） 重组载体疫苗（乳酸菌作为载体？）尚未正式上市。 2013.11.23 湖北省动物疫病培训 * 4、亚单位疫苗与合成肽疫苗 利用物理化学方法提纯病原微生物中具免疫原性的组份，或者利用基因工程表达该组分，纯化后加入佐剂而制成。 猪传染性胸膜肺炎的亚单位疫苗中含有毒素I，毒素II，毒素III和外膜蛋白等，能提供对所有15个血清型的交叉保护力。 口蹄疫合成肽疫苗：人工合成口蹄疫病毒VP1蛋白中具有较强免疫原性的抗原片段，加入佐剂制成。 * 2013.11.23 湖北省动物疫病培训 * 多肽合成仪 Pall 超滤 鸣谢：上海申联生物科技公司，口蹄疫多肽疫苗设备 2013.11.23 湖北省动物疫病培训 * 5、核酸疫苗 将病原微生物或寄生虫基因组中编码免疫原性蛋白的基因克隆到真核表达载体中获得重组质粒，这种质粒即为核酸疫苗。 制备核酸疫苗的常用真核表达载体有pcDNA3.1(+)、pSV2、pRSV和pCI等。 核酸疫苗可以用大肠杆菌大量制备，成本较低。 但基于安全性考虑，核酸疫苗多处于实验研究阶段，尚未大量应用。 * 5、核酸疫苗构建策略 2013.11.23 * 湖北省动物疫病培训 核酸疫苗的免疫应答机制 2013.11.23 * 湖北省动物疫病培训 2013.11.23 湖北省动物疫病培训 * 6、转基因植物疫苗（transgenic plant vaccine） 将免疫原性基因插入植物基因组中，获得表达免疫原性的植物，再从植物中提纯蛋白用于注射动物或直接将植物饲喂动物产生免疫力。如转入微生物抗原的马铃薯、玉米或蔬菜等，称为转基因可食疫苗 （ediable vaccine）。 * 2013.11.23 湖北省动物疫病培训 * 制备转基因植物疫苗的两种方法： 构建稳定表达的整合表达系统，将病原免疫原性基因整合到植物基因组中而获得表达，并可遗传到下一代植物中； 构建含有外源基因的植物病原如农杆菌等，利用这种植物病原感染植物，使抗原在植株中获得瞬时表达。 转基因植物疫苗制备方法 6、转基因植物疫苗（技术路线） 2013.11.23 * 湖北省动物疫病培训 6