天净沙系列Gibson无缝克隆试剂盒-天恩泽.PDFVIP

天 CAT#: 160680-25 CAT#:160680-50 净 低温运输，-20℃保存 沙 系 列 Gibson 无缝克隆试剂盒 Gibson Seamless Cloning and Assembly Kit 使用手册V1.0 北京天恩泽基因科技有限公司 北京市海淀区上地信息路26 号北京市留学人员海淀创业园中关村创业大厦506 网址： ；电话：400-6765278 ；电邮：order@ 产品及特点 Gibson 无缝克隆是一种简单、快速并且高效的DNA 定向克隆技术，该 技术突破传统，不依赖内切酶和连接酶，不受限制性内切酶酶切位点的限制， 利用同源重组的原理，可将任意方法线性化后的载体和与其两端具有 15-25 bp 重叠区域的DNA 片段定向重组，可实现 1-5 个片段的高效无缝拼接。本 产品的原理示意图如下图： 本产品特点总结如下： 1. 简单、高效地定向克隆DNA 片段。 2. 不依赖内切酶和连接酶，不受限制性内切酶酶切位点的限制。 3. 反应及转化时间短，阳性率达95%以上。 4. PCR 产物（仅有目的条带、无非特异条带和引物二聚体等额外序列）可 直接进行重组反应，无需纯化。 25 次 50 次 规格及成分 成 份 编 号 塑料袋包装 塑料袋包装 2 x Gibson Mix 160680A 125 uL 250 uL 阳性对照DNA 片段 160680B 10 uL 10 uL 阳性对照线性化载体 160680C 10 uL 10 uL 超纯水 100935 1 mL 1 mL 使用手册 1 份 运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年。 自备试剂 线性化载体、DNA 片段、感受态细胞、SOC 或LB 培养基和培养皿（含抗菌 素和不含的） 使用方法 1. 线性化载体的制备： 选择合适的克隆位点，对载体进行线性化。尽量选择无重复序列且载 体克隆位点上下游20bp 区域内GC 含量在40%-60%质检的位点进行克 隆。可通过单酶切、双酶切或PCR 扩增后胶回收的方法来制备。（如果线 性化不彻底，将会导致阴性克隆的产生，推荐使用双酶切或 PCR 扩增的 方法。） 2. 插入的DNA 片段的制备： 1) 单个插入片段的克隆引物设计：克隆引物包括插入片段特异性引物序 列和重叠序列 正向引物：5’-载体正向末端同源序列+插入片段正向特异性引物-3 ’ 反向引物：5’-载体反向末端同源序列+插入片段反向特异性引物-3 ’ 注：同源序