《分子生物学常用技术在中医药研究中的应用》实验课 07 组织总RNA提取.pptVIP

* * 实验 17 组织总RNA提取 目 的 1．了解某一特定组织或细胞某一特定 mRNA 转录量的变化，如 RT-PCR、Northern blot 等。 2．了解某一特定组织或细胞全部 mRNA 转录量的变化，如 DD-PCR、基因芯片等。 3．获得某一特定组织或细胞全部 mRNA，以便建立 cDNA 库等。 4．获得某一特定组织或细胞全部 RNA。 以上工作的前提是制备纯净且完整的 RNA。 现代医学研究表明，人类的绝大多数疾病都是由若干基因表达的改变所引起的。根据生物学“中心法则”原理，基因的表达包括转录与翻译两个阶段。其中，由 DNA 到 RNA 的转录过程受到各种因素的调节，其调节水平反映出某种或某些特定的因素对相关基因表达的调节能力。已有的研究一再表明，中医药所发挥的治疗与预防作用是直接或间接调整了基因的转录而实现的。 RNA 主要由 rRNA（占总量的 80～85％），tRNA 和核内小分子RNA（占总量的 10～15％）以及mRNA（占总量的1～5％）所构成。理论上认为每克组织（或108个培养细胞）可提取 5～10 mg RNA。 提取总 RNA 的方法有多种，比如： （1）本实验介绍的方法，采用 Trizol 试剂，或类似的方法，称为一步法，方便而快捷。缺点是 RNA 的获得量偏低，质量不够纯净。 （2）超离心方法，可以获得丰富且质量