HPLC理论及相关产品介绍.pptVIP

Corporate Divisional Structure公司产品组成 LabScience 色谱基本理论 色谱法的分离原理 溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。 平面色谱法 -薄层层析法TLC，包括硅胶板层析和纸层析 气相色谱法 液相色谱法 液相色谱分类 根据反压高低不同 中低压层析 高效液相色谱 根据分离模式不同 正相 反相 根据原理不同 离子交换色谱法 体积排阻色谱 疏水色谱 亲和色谱 正相—反相色谱 反相的特点 大多数物质都可以采用反相色谱柱进行分离 方法开发比较简单 -流动相主要是甲醇/水；乙腈/水；或者添加一定浓度的离子对试剂 分析碱性物质常用的离子对试剂 -烷基磺酸盐，如戊烷磺酸钠、辛烷磺酸钠、外高氯酸、三氟乙酸等 分析酸性物质常用的离子对试剂 -四丁基季铵盐，如四丁基溴化铵、四丁基铵磷酸盐 离子交换色谱 原理 - 被分离组分在色谱柱上分离原理是树脂上可电离离子与流动相中具有相同电荷的离子及被测组分的离子进行可逆交换，根据各离子与离子交换基团具有不同的电荷吸引力而分离 阳离子交换剂 -磺酸基/羧基 阴离子交换剂 -季铵基/DEAE 流动相 -缓冲盐 应用 -主要用于分析有机酸、氨基酸、多肽、核酸、核苷酸等 体积排阻色谱 原理 -凝胶色谱，又称空间排阻色谱。它是利用某些凝胶对混合物各组分因分子量不同，其阻滞作用也不同而进行分离、分析的方法 -大孔径的填料，100A-2000A 凝胶过滤色谱（分子筛） -大分子蛋白、多糖的分离 凝胶渗透色谱 -高分子材料的分离 高效液相色谱产品HPLC HPLC优点 速度快 -通常分析一个样品在15~30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成 分辨率高 -可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果 灵敏度高 -紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg 柱子可反复使用 -用一根色谱柱可分离不同的化合物 样品量少，容易回收 -样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备 HPLC系统 HPLC流路图 色谱柱的构造 柱管、压帽、卡套、筛板（滤片）、接头 分析型 -常规分析柱（4.0mm、4.6mm） -窄径柱（1.0mm、2.1mm） - 毛细管柱（0.2-0.5mm） 制备型 -半制备柱（〉5mm，7.8mm、9.2mm、10mm） -制备柱（21.2mm、30mm、50mm） 柱填料基质 硅胶基质- pH 3~8 Al2O3 . nH2O - pH1~14 聚合物基质 - pH1~14 硅胶基质 不定型硅胶 较大的表面积—增强选择性 载量 球形硅胶 市面上主流—粒径精确，柱效相对高 色谱柱---性能影响因素 硅胶纯度 ? 填料硅胶的纯度与残留金属离子浓度 色谱柱尺寸 ? 填料床的长度和内径 颗粒形状 ? 球型或不规则型 粒径 ? 平均颗粒直径, 通常3-10μm 表面积 ? 颗粒外表面和内部孔表面的总和, 以m2/gram表示 孔径 ? 颗粒的孔或腔的平均尺寸, 范围80-300? 色谱柱---性能影响因素 键合类型 ? 单体键合 - 键合相分子与基体单点相连 ? 聚合体键合 - 键合相分子与基体多点相连 碳覆盖率 ? 与基体物质相连的键合相的量 封端 ? 键合步骤之后, 用短链将裸露的硅羟基键合后封闭起来 色谱柱---性能影响因素 色谱柱尺寸 --- 对色谱分离的影响 ? 短柱 (15-100mm) - 运行时间短, 柱压低 ? 长柱 (150-250mm) - 分辨率高, 运行时间长 ? 窄径柱 (? 2.1mm) - 检测器灵敏度高 ? 宽径柱 (3-21.2mm) - 载样量高 色谱柱---性能影响因素 色谱柱---性能影响因素 大孔径填料适用于大分子分析 大孔径300? 全多孔色谱柱 可用于分离蛋白质和多肽 分子量虽小但hydrodynamic volume(水动力学 体积)较大的分子 色谱柱---性能影响因