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微生物的无菌操作及接种技术 2016.10 西安 微生物无菌操作及接种技术  微生物无菌操作技术  接种技术 微生物无菌操作技术 无菌操作技术：指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生 物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施。 无菌操作 目的：  保证待检物品不被环境中微生物污染；  防止被检微生物在操作中污染环境或感染操作人员。 无菌操作材料  接种工具 1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀 无菌操作材料  材料  器械和用品：酒精灯、记号笔、标签、火柴、灭菌培 养皿、无菌水、试管架  菌种  培养基： 微生物无菌操作技术与接种技术  无菌技术：指在微生物实验工作中， 控制或防止各类微生物的污染及其 干扰的一系列操作方法和有关措施。  接种：将微生物接到适于它生长繁 殖的人工培养基上或活的生物体内 的过程。 微生物接种技术  接种的准备工作  无菌环境的要求与保持  进入无菌室前的准备  无菌操作的要求  接种的操作方法 接种的准备工作 无菌环境的要求与保持 无菌室 无菌环境 超净工作台 无菌环境的要求与保持 1、无菌室 （1）无菌室的结构：  应有更衣间、缓冲间、 操作间  应有良好的通风条件， 安装空调设备及过滤设 备 无菌室的结构 无菌环境的要求与保持 （2 ）无菌室的消毒和防污染  无菌室内空气测试应基本达到无菌。  每日（使用前）紫外线照射（1~2小时）.  每周用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时）.  每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒。  定期作实验室沉降菌计数，以检查无菌室微生物生长繁殖 动态。 无菌环境的要求与保持 2、超净工作台 超净工作台是为实验室工作提供无菌操作环境的设施，以 保护实验免受外部环境的影响，同时为外部环境提供某些程 度的保护以防污染并保护操作者。 原理：超净工作台的洁净环境是在特定的空间内，洁净空 气 (进滤空气)按设定的方向流动而形成的。以气流方向来分， 现有的超净工作台可分为垂直式，由内向外式以及侧向式。 垂直流超净工作台 垂直流超净工作台 水平流超净工作台 无菌环境的要求与保持 超净台的使用与维护  风速保持在0.32-0.48米/秒  使用前打开紫外灯照射40~60min  开启超净工作台工作电源，关闭紫外灯，并用75%的酒精或0.5%过氧乙 酸喷洒擦拭消毒工作台面。  使用中，有机玻璃罩受到污染，严禁用酒精棉球擦拭，请用含水棉布檫拭；  请保持超净台整洁、干燥，不要堆积杂物；  使用完毕，关闭煤气开关或酒精灯；  使用完毕后，用消毒液擦拭工作台面，关闭工作电源，重新开启紫外灯照 射15min.  定期做无菌试验，以测定净化台是否符合无菌要求。 无菌环境的要求与保持 3、无菌器材准备  灭菌器材：玻璃器皿、培养基、无菌衣等.  消毒器材：接种试管、无菌室内的凳子、试管架、天平、 工作台等 进入无菌室前的准备 （1）定期检查无菌环境的空气是否符合规定； （2 ）用紫外线灭菌处理30~60min ； （3 ）检查无菌器材是否完备； （4 ）实验人员进入无菌室前先用肥皂洗手，然后用75 ％酒 精棉球将手擦干净。 （5 ）缓冲室内换上洗净并经紫外线灯照射过的工作衣、帽、 鞋。 无菌操作要求 （1）在操作中不应有大幅度或快速