【生物化学实验】血清γ球蛋白的分离纯化与鉴定.pptVIP

生物化学综合实验血清γ球蛋白的分离纯化与鉴定 实验目的 血清γ球蛋白的分离纯化与鉴定 蛋白质分离纯化与鉴定 血清γ球蛋白的分离纯化与鉴定 一、盐析法粗分离血清γ-球蛋白 盐析法分离血清球蛋白 具体操作 二、葡聚糖凝胶柱层析脱盐 凝胶柱层析脱盐 目的与要求 凝胶层析法原理 葡聚糖凝胶（Sephadex) ▲ 加样与洗脱 ▲ 凝胶的再生 三、DEAE－纤维素离子交换层析 离子交换层析的基本原理 离子交换层析的基本原理 蛋白质的电离示意图 DEAE－纤维素离子交换层析纯化γ－球蛋白 操 作 四、γ－球蛋白纯化液的浓缩 五、γ－球蛋白鉴定 醋酸纤维素薄膜电泳鉴定 醋酸纤维素薄膜电泳 操作步骤： 1、装置电泳箱。区分电泳箱正负极 。 2、点样：浸于巴比妥溶液中的薄膜，滤纸轻轻吸 干—半干燥态。铅笔标记；点样器沾适 量新鲜血清，垂直点样。 3、放入电泳槽，使膜保持水平。 4、通电：110伏，1小时。断电后，取膜。 5、染色：氨基黑10B染色10min。 6、浸洗：浸洗液浸洗3次，每次5-10min。 按泳动快慢顺序分为：清蛋白、α1、α2、β、γ—球蛋白。 试剂材料 仪器 注意事项 思考题 电泳条件：电压：90－110 V； 时间：50分钟。 染 色：电泳毕，关