菌落的测定与大肠杆菌总数ppt.pptVIP

豆豉中菌落总数的测定 豆豉中菌落总数的测定检验程序 一、实验原理 是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1mL检样中形成的细菌菌落总数。以 CFU/g（mL）来表示。稀释后菌样中的微生物单细胞分散在琼脂平板上，培养后每个活细胞可形成一个单菌落，即形成单位（colony forming units，cfu），根据每个培养皿形成的cfu数乘以稀释度，就可以推算出菌样的含菌数。 按国家标准方法规定，即在需氧情况下， 36 ±1℃培养48±2 h，能在平板计数琼脂上生长发育的细菌菌落总数。所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。一定条件包括培养基成分、培养温度和时间、pH、是否需要氧气等。 二、实验试剂与仪器 试剂：0.85%生理盐水、琼脂培养基：胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g、蒸馏水1000mL、pH 7.0±0.2 仪器：恒温培养箱、托盘天平、电炉、吸管、三角瓶、培养皿、普通试管、试管架、酒精灯、灭菌刀或剪刀、75%酒精棉球、玻璃蜡笔，灭菌枪头。 三、实验步骤 1、检样稀释及培养 （1）以无菌操作，将检样包装打开，称取25g 豆豉，放于含有225ml灭菌生理盐水的500ml灭菌玻璃三角瓶内（瓶内预先置适当数量的玻璃珠），经充分振摇做成1：10的均匀稀释液。 （2）用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均匀，做成1：100的稀释液。 （3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。 三、实验步骤 （4）根据食品卫生检验标准要求和检样的菌落数量，选择3个连续适宜稀释度即10－1、10－2、10-3分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。 （5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿15ml~20mL，并转动平皿使与稀释检样混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。 （6）等琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃恒温箱内培养（48±2）h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数，即得1mL样品所含菌落总数。 四、实验结果与记录 10-1 10-2 10-3 报告数 1 2 稀释液对照皿 空白皿 五、分析结果与存在的问题 豆豉中大肠菌群的计数 检测程序 一、实验原理 一群在36℃条件下培养48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌群主要来源于人畜粪便, 作为粪便污染指标评价食品的卫生状况, 推断食品中肠道致病菌污染的可能。食品中大肠菌群数系以没1 mL（g）检验内大肠杆菌最可能数（the most probable number ，MPN）表示。 二、实验试剂与仪器 试剂：月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST），煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB） ，无菌生理盐水（可用玻璃瓶装盐水后杀菌获得） 仪器：恒温箱 、恒温水浴锅、药物天平、pH计和缓冲液，普通带橡胶塞试管，培养皿，枪头，小试管（产气时观察），玻璃瓶，玻璃珠，大三角瓶 三、实验步骤 1、样品的处理和稀释 ①固体和半固体食品：以无菌操作取25g豆豉样品,放入装有225 mL生理盐水的无菌均质杯内,于8000 r/min均质1min～2min,制成1:10样品匀液，或放入225 mL生理盐水的无菌均质袋中，用均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。 ②根据对样品污染情况的估计,按上述操作，依次制成系列十倍系列样品匀液。这里取10-4、10-5、10-6稀释倍数进行接种。 ③样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，必要时要进行调节，如有些果汁pH值很低，如果不进行调节，检验结果的误差可能就会比较大。 三、实验步骤 2、第一步：初发酵 ①取10-4、10-5、10-6倍数稀释液，每个稀释度接种三管单料月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL；同时每个稀释度接两管双料月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种10mL。36℃±1℃培养24h±2h，检查倒管内是否有气泡产生或轻摇试管时是否有密集连续的细小气泡从管底逸出，如未产气则继续培养至48h±2h。记录在24h和48h内产气的LST肉汤管数。未产气者为大肠菌群阴性；对产气者，则进行复发酵试验。 注意：以48h±2h为最终观察结果时限。结果也以此时为最终结果。 三、实验步骤 3、第二步：复发酵 ①用接种环从所有48h±2h内发酵产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐(