基于壳聚糖-Ru( bpy) -SiO纳米粒子 电化学发光传.docVIP

基于壳聚糖/Ru( bpy) 3+ /SiO2纳米粒子 电化学发光传 　　1引言 　　尿酸是核蛋白和核酸的代谢产物’人体内尿酸过量是许多疾病的征兆’如痛风、肾功能衰竭、心血管疾病等，故人体内尿酸的检测在临床诊断方面有着重要意义。目前,测定尿酸的方法主要有色谱法、分光光度法、荧光法、化学发光法、电化学法等。 　　电化学发光因其设备简单、灵敏度高、适用范围广等特点而备受关注。但是目前利用电化学发光法测定尿酸的方法较少。近年来,通过将发光试剂固定在电极表面制备得到固相电化学发光传感器’这样既节约了昂贵的发光试剂，又提高了灵敏度,拓宽了电化学发光法在分析化学中的应用。溶胶-凝胶膜法和Nafon/MCNT是目前应用最多的固定化技术，但是溶胶-凝胶法制备的电化学发光传感器稳定性较差。利用二氧化硅微球包埋联吡啶钌，可以改善Si02溶胶-凝胶法固定联吡啶钌传感器的稳定性。壳聚糖分子中含有丰富的游离氨基和羟基,具有良好的吸附能力、导电能力和生物相容性,是电化学发光传感器中较优良的材料。 　　本研究利用反相微乳液法制备得到壳聚糖-Ru(bpyg+-Si02复合纳米粒子（CRuSNPs)，带正电荷的CRuSNPs与带负电荷的Nafion通过静电作用自组装固定于玻碳电极表面，制备了电化学发光传感器。此传感器具有良好的稳定性和重现性，用于尿酸的免标记检测，结果令人满意。与临床上测定尿酸的方法相比’本方法简单、试剂用样量少、选择性好。 　　2实验部分 　　2.1仪器与试剂 　　MPI-E型电致化学发光分析系统（西安瑞迈电子科技有限公司），Zennium电化学工作站（德国Zah-ner公司），UV-1600PC紫外-可见分光光度计（中国上海美谱达仪器有限公司），F-4600荧光分光光度计(日本日立公司），RT5POWER电磁搅拌机（德国IKA公司），WF-300D超声波清洗机（宁波海曙五方超声设备有限公司），TDL-802B型离心机（上海安亭科学仪器厂），PT-RO10L实验室超纯水设备（上海品拓环保工程设备有限公司）。三电极系统:工作电极为裸玻碳电极或修饰电极,Pt丝为对电极,Ag/AgCl(饱和KCl溶液）为参比电极。 　　多壁碳纳米管（MCNT,中国科学院成都有机化学有限公司，gt;7.5%,7?15nmX0.5?1光传感器。图1为电化学发光传感器的原理图。 　　2.4实验方法 　　以CRuNPs/Nafion/MCNT/GCE修饰电极为工作电极，当电解池中的尿酸与修饰电极作用15min后，在~0.2?1.4V范围内进行循环伏安扫描，扫描速率为100mV/s，介质为0.10mol/LPBS缓冲溶液(含50mmol/LTPA，pH7.4)，光电倍增管负高压为800V，记录电化学发光信号，通过电化学发光强度值对尿酸进行定量分析，所有实验均在室温下进行，所有电位值均相对于Ag/AgCl参比电极。 　　 　　3结果与讨论 　　3.1CRuSNPs的表征 　　对合成的CRuSNPs进行了TEM表征（图2)，由图2可知，所制备的纳米颗粒的平均直径为50nm且分散效果较好。CRuSNPs的紫外和荧光光谱图见图3。由图3A可知，合成的CRuSNPs复合纳米粒子与游离态的Ru(bpy)23+紫外吸收光谱形状相同，可知CRuSNPs在水溶液中具有很好的分散性。由图3B可知，在458nm激发波长下，游离态的Ru(bpy)〗+最大发射波长为596nm，而CRuSNPs的最大发射波长较Ru(bpy)]+蓝移了17nm，这可能是因为CRuSNPs溶液中的SiO-基团与Ru(bpy)〗+之间的静电吸附使得Ru(bpy)2/被束缚在SiO〗纳米粒子内部，致使CRuSNPs在溶液中时，很少与周围的水分子相互作用，显示出荧光发射波长相对较短[18]。 　　3.2传感器的电化学及电化学发光行为 　　实验对不同电极表面进行了电化学及电化学发光行为进行研究。由不同电极在0.1mol/LPBS(pH7.4)中循环伏安图（图4A)可见，Nafion/MCNT修饰电极（曲线b)的电流强于裸玻碳电极(曲线a)，这是因为MCNT具有较强的导电性，说明Nafion/MCNT已修饰于玻碳电极上，而CRuSNPs/Nafion/MCNT修饰电极（曲线c)的电流强于Nafion/MCNT修饰电极（曲线b)，这是因为CRuSNPs纳米粒子具有较大的比表面积，电子传导能力增强，且由曲线c还可看出，在+1.1V处出现可逆的氧化还原峰，这正是Ru(bpy)3+的特征峰，说明CRuSNPs已成功修饰于Nafion/MCNT上。 　　由不同电极在50mmoL/LTPA(0.1moL/LPBS，pH7.4)中的电化学发光图（图4B)可知，裸电极（曲线a)和Nafion/MCNT修饰电极（曲线b)几乎不发光，但将C