益气活血法对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用实验研究.docVIP

益气活血法对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用实验研究 　　贺运河　古继红　陈光贤　邱晓敏　曾旭灿 　　摘要：目的探讨益气活血法制定的益气活血方对心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法清洁级健康SD大鼠30只，雌雄各半，体重(300+30)g，随机分为益气活血方组、缺血再灌注组、假手术组，每组10只。结扎冠状动脉左前降支后30min，再松开结扎线120 min，以制备急性心肌梗死(AMI)缺血再灌注损伤模型。实验结束后，迅速取出心脏，生理盐水冲洗后，10％甲醛固定24h。常规石蜡包埋，于心肌梗死区中部沿左室轴线每隔1mm连续切取数张4μm厚的切片，分别作苏木精一伊红染色，进行心肌组织病理形态学检查。结果益气活血方能减轻缺血再灌注时心肌组织织细胞超微结构的形态学损伤。益气活血方组细胞核结构似假手术组，核周间隙仍有轻度肿胀，线粒体超微结构与假手术互相仿。结论益气活血方对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。 　　关键词：心肌缺血：再灌注损伤；益气活血方；心肌梗死 　　中图分类号：R542.2 R285.5　文献标识码：A　文章编号：167－1349(2007)08－0707－02 　　 　　近年来，急性心肌梗死(AMI)治疗学的重要进展之一是再灌注治疗。现已证实，再灌注治疗可使梗死相关冠状动脉再通，从而挽救濒危心肌，缩小梗死面积，从而降低病死率并改善幸存者的心功能。但缺血一定时间的心肌在重新恢复血液供应后，心肌不一定都会恢复其正常功能和结构，反而出现心肌细胞损伤加重的表现，如心律失常、出血性坏死、梗死面积扩大、心功能低下等现象，即所谓心肌缺血再灌注损伤。这也是目前临床冠状动脉旁路移植、经皮冠状动脉腔内成形术(PTCA)及溶栓术等心脏介入性治疗常见的严重并发症。因此，认为研究心肌缺血再灌注损伤的发生机制及如何减轻心肌缺血再灌注损伤从而取得更好的“净效应”，已成为防治缺血性心脏病和临床心脏介入性治疗的一个重要课题。 　　中医理论认为心主血脉，心气虚弱则无力鼓动心血之运行，致使血涩不通而成真心痛。因此，气虚血瘀是心肌梗死的主要病机，益气活血为其主要治法。据此制定了益气活血方(由人参、黄芪、水蛭、川芎、丹参、地龙等组成)用于临床，取得了明显的疗效。基于此，现对益气活血方进行了实验研究，为其临床疗效提供理论依据。 　　 　　1　材料与方法 　　 　　1．1 益气活血方煎剂浓缩液的制备益气活血方由人参20g，黄芪30g，地龙10g，川芎10g，水蛭10g，丹参20g等组成。饮片由广州中医药大学提供。购回后置煎煮容器内加相当于药材量5倍的自来水浸泡2h，煮沸后再以微火煎煮30min，过滤取汁得头煎。药渣再加3倍水煎煮20min，过滤取汁得二煎，两煎混合，于水浴上浓缩至100％浓度(每毫升药液相当于生药1g)，装在若干只100mL瓶内，加盖密封，高温消毒后，置4℃冰箱中保存备用。 　　 　　1．2 仪器SC－3型电动人工呼吸机，JEM－1200EX型透射电镜，OVION多功能研究显微镜，LKB－型超薄切片机等。 　　 　　1．3 实验方法 　　1．3．1 动物分组清洁级健康SD大鼠30只，雌雄各半，体重(300+30)g，由广州中医药大学实验动物中心提供。随机分为假手术组、缺血再灌注组、益气活血方组，每组10只。 　　1．3．2 造模方法用10％的水合氯醛腹腔注射(0.3mL／100g－0.4 mL／100 g体重)麻醉后，气管插管连接SC－3型电动人工呼吸机，室内空气人工呼吸，呼吸频率40／min，潮气量20mL／kg，颈总动脉插管监测血压。四肢皮下置针型电极，记录心电图变化。胸部去毛，沿左锁骨中线纵行切开皮肤约2cm，于胸骨左缘(3－4)肋间钝性分离肌层，打开胸腔，剪开心包，轻压右侧胸廓，挤出心脏。在左冠状动脉前降支距左心耳下缘2mm处穿以0号丝线备用，稳定15min，行如下操作：①假手术组丝线穿过冠状动脉左前降支后，但不结扎。②缺血再灌注组结扎冠状动脉左前降支后30min后再松开结扎线，心电图相关导联(I，aVL)抬高的ST段下降在1／2以上为缺血再灌注成功，再灌注120min。③益 气活血方组实验过程同缺血再灌注组。 　　1．3．3给药方法各组动物每天09：00－10：00，16：00－17：00用灌胃方式给药或蒸馏水各1次。假手术组及缺血再灌注组每天09：00－10：00，16：00－17：00用蒸馏水4mL／kg灌胃。益气活血方组用量相当于临床成人等效剂量的4倍[8mg／(kg?d)]，药物溶于等量的蒸馏水中灌胃，连续5d，末次灌胃1h后进行心肌缺血再灌注实验。 　　1．3．4 取材方法实验结束后，迅速取出心脏，生理盐水冲洗，10％甲醛固定24h。常规石蜡包埋，于心肌梗死区中部沿左室轴线每隔l mm连续切取数