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链球菌属特性及其检验 　　[摘要] 目的：总结链球菌属的特性及其检验技术，结合临床经验，进一步提高细菌分离及鉴定水平。方法：采用显微镜检查、分离培养、细菌生化反应、血清学试验等进行分离和鉴定。结果：根据菌体形态、菌落形态、溶血特征将链球菌分为甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、丙型链球菌；按链球菌细胞壁中多糖抗原不同，可分成A、B、C、D等20个群。结论：链球菌是临床常见的致病菌，正确掌握检验方法，科学地分离和鉴定，有助于临床做出合理的诊治决策。 　　[关键词] 链球菌属；特性；分离培养；生化反应；血清学试验 　　[中图分类号] R446.5[文献标识码] B [文章编号] 1674-4721（2010）11（a）-080-02 　　 　　链球菌属细菌广泛分布于自然界、人及动物肠道和鼻咽部，大多数不致病。其中A、B群及肺炎链球菌是本属的3种重要致病菌，可引起各种化脓性炎症、医源性伤口感染、新生儿败血症、细菌性心内膜炎以及风湿热、肾小球肾炎等超敏反应性疾病[1]。另外草绿色链球菌为条件致病菌。因此，本属细菌的鉴定、药敏试验是微生物检验工作的重要内容之一，临床上常见的标本包括咽拭子、痰液、分泌物、穿刺液、尿液、脑脊液和血液。现将本属的特性及其检验总结如下： 　　1 资料与方法 　　1.1一般资料 　　本院微生物实验室2009年共接收咽拭子样本299例、痰液样本1 319例、分泌物817例、穿刺液239例、尿液704例、脑脊液54例和血液培养815例，合计4 247例。其中门诊患者样本239例，住院患者样本4 008例。细菌培养阳性结果1 475例，阳性率为34.73%。其中链球菌属阳性83例，占5.63%。 　　1.2 检验方法 　　根据不同疾病采集不同标本。 　　1.2.1 显微镜检查咽拭子、痰液、脓液、穿刺液、脑脊液等标本可直接涂片革兰染色，镜检见链状排列革兰阳性球菌可初步报告，及时供临床参考。 　　1.2.2 分离培养血液标本需要先增菌培养，脓液、咽拭可直接接种血琼脂平板。链球菌属初代分离需5％ CO2，35℃ 24 h观察菌落性状。菌落太小可延长观察时间。 　　1.2.3 鉴定根据菌体形态、菌落形态、溶血特征以及下列鉴定试验进行。 　　1.2.3.1 杆菌肽敏感试验方法：用棉拭子将待???菌均匀涂布于血琼脂平板上，稍干后贴一张含0.04 U的杆菌肽纸片，置35℃孵育18～24 h，观察结果。A群链球菌为阳性，而其他链球菌对杆菌肽通常耐药，此法可作为筛选试验。 　　1.2.3.2 CAMP试验。无乳链球菌能产生CAMP因子，可促进金黄色葡萄球菌溶血能力，使其产生显著的协同溶血作用。试验时先将金黄色葡萄球菌沿直径划线接种，再沿该线垂直方向接种无乳链球菌，两线不得相接，间隔3～4 mm。35℃孵育过夜，两种划线交界处出现箭头状溶血，即为阳性反应。本法可作为无乳链球菌的初步鉴定试验。 　　1.2.3.3 Optochin试验方法：挑取待检菌密集划线接种在血琼脂平板上，贴放Optochin纸片（5 μg/片），35℃孵育18～24 h，观察抑菌环大小。Optochin能干扰肺炎链球菌叶酸合成，抑制该菌的生长，故肺炎链球菌对它敏感，而其他链球菌对其耐药。肺炎链球菌抑菌圈直径常大于14 mm。 　　1.2.3.4 胆汁溶菌试验：胆汁或胆盐能活化肺炎链球菌的自溶酶，促进细菌细胞膜破损或菌体裂解自溶。在血琼脂平板上选择出待检的菌落，观察记录菌落特点，然后于菌落上加1滴100 g/L去氧胆酸钠溶液，35℃孵育30 min观察结果。肺炎链球菌为阳性，表现为菌落消失。 　　2 结果 　　2.1 链球菌属的特性 　　2.1.1 形态与染色菌体呈圆形，直径为0.8～1.0 μm，呈链状排列，在液体培养基中易成长链。在脓汁标本中为短链，成双或单个散在。革兰染色阳性。无鞭毛、无芽胞，某些菌株在血清肉汤中可有荚膜。肺炎链球菌呈矛头状。 　　2.1.2 培养特性本属细菌大多为需氧或兼性厌氧菌，少数微需氧及专性厌氧。营养要求较高，在含血液或血清、葡萄糖、氨基酸、维生素等的培养基上生长良好。最适温度为35～37℃，最适pH为7.4～7.6，在5％ CO2环境下生长更好。在液体培养基如血清肉汤中，溶血性菌株呈絮状或颗粒状沉淀生长。上层液体澄清，可有菌膜。不溶血菌株则均匀浑浊生长。在血琼脂平板上，经35℃ 18～24 h培养后可形成灰白色、圆形、凸起、直径为0.10～0.75 mm的细小菌落，菌落周围出现不同溶血环。 　　2.1.3 生化反应本属细菌触酶试验阴性，能分解葡萄糖产酸不产气，对其他糖类的分解因不同菌株而异。 　　2.2 分类 　　链球菌在血平板上的溶血现象以及血清学分类仍是目前鉴定链球菌的常规使用方法。