靶向人VEGF165SiRNA慢病毒构建和鉴定.docVIP

靶向人VEGF165SiRNA慢病毒构建和鉴定 　　[摘要]目的：构建靶向VEGF基因的SiRNA慢病毒载体，并包装病毒。 方法：针对已经筛选确定的SiRNA 有效靶序列，合成靶序列的OligoDNA，经双酶切后与PGC SIL-GFP慢病毒载体连接，构建慢病毒载体PGCSIL-SiVEGF，以293T细胞包装得到干扰病毒LV-SiVEGF，根据细胞表达绿色荧光蛋白水平计算病毒滴度；病毒感染人脐静脉内皮细胞HUVEC，通过定量RT-PCR检测VEGF的mRNA表达。结果：测序结果表明，靶向人VEGF的SiRNA慢病毒载体构建成功，包装后的慢病毒滴度为2×109 ifu/μl；感染HUVEC细胞后，实验组和对照组相比VEGF mRNA表达水平显著降低。结论：成功构建人VEGF SiRNA 慢病毒LV-SiVEGF。 　　[关键词]VEGF；慢病毒载体；RNA干扰技术 　　[中图分类号]Q813.1[文献标识码]A[文章编号]1008-6455（2011）07-1084-03 　　 　　Construction and identification of lentivirus of RNA interference 　　targeting VEGF165 gene 　　LIU Bei,MA Ge-jia,SONG Bao-qiang 　　(Department of