血袋细菌内毒素定量检测方法的建立PPT课件.ppt

血袋保养液细菌内毒素定量检测方法的建立;细菌内毒素的基本知识;2. 细菌内毒素标准品 细菌内毒素国家标准品（RSE）：批号：981 效价： 9000EU 细菌内毒素工作标准品（CSE）：以细菌内毒素国家 标准品为基准标定 效价 ;3. 细菌内毒素在水溶液中的状态;4. 鲎试剂 从海洋生物鲎的血液提取的生物试剂，只有鲎血与内毒素有特异性的凝胶反应，该试剂达到了国际标准化，全世界均采用该试剂检测细菌内毒素，尚不能采用生物合成的办法制造。 ; 实验证实，临界时间t0.02 与内毒素浓度C之间也是负相关。通过对标准品进行实验，可得C-t0.02 关系曲线，对该曲线采用最小二乘法拟合，可以求解出a0、b0的值。在对实验品进行检测时，根据实验品的临界反应时间t0.02和标准曲线方程即可求出实验品的内毒素浓度。 ;6.2 反应速率测定法 大量实验表明，内毒素浓度越高成胶时间就越快，即反应速度越快，将动力学反应曲线变换成微积分曲线，即反应速率曲线，其反应速率最大的点即是反应曲线的拐点，该点的时间作为反应时间就是浊度反应时间法中的t50，最大的反应速率也与内毒素含量相关，通过对标准品进行实验，可得C-Vmax关系曲线，对该曲线采用最小二乘法拟合，可以解出a0、b0的值。在对试验品进行检测时，把试验品的最大反应速率Vmax代入标准曲线方程，即可求出其内毒素浓度值。; ;7. 血袋保养液细菌内毒素定量检测;（2）分别设定好“初始浓度”（为标准曲线的最高浓度点）、 “稀释梯度”（为各标准点之间的稀释倍数）、“浓度点 数”（为所做标准曲线点的个数）、“平行管数”（为各 点重复的管数） 如下图所示： ;（3）点击“自动设置标准曲线” ，在表格中出现所设置的数 据，再点击“阴阳性对照”，选中“阴性对照”，填写平行 管数，点击“试管位置选择”， 点击“自动选择”，如下图 所示： ;（4）点击“开始检测”，程序设置完毕。新建立的标准曲线保 存在 ???检品管理中心”的标准曲线内，新标准曲线以默 认【鲎试剂批号】+【内毒素批号】+【当前时间】作 为文件名存盘，也可在画面底列“保存文件名”处自行输 入，如下图所示： ;（5）溶解分装鲎试剂 根据用量溶解鲎试剂，将溶解的鲎试 剂混合在一起，分装到无热原的仪器专用检测管内， 每支检测管内0.1ml 。 （6）加样 取稀释好的内毒素系列浓度溶液，根据所设定管 数分别加入有鲎试剂的小试管中，每管0.1ml，另取细 菌内毒素检查用水做阴性对照。 （7）检测 每个浓度点在加完样后应立即用封口膜封口，放 入细菌内毒素测定仪设定位置，仪器自动开始检测。 待标准曲线最后一个浓度的OD值超过预设值后，用鼠 标点击“手动停止检测”，停止数据采集。 （8）点击标准曲线坐标画面，生成并储存标准曲线，计算 出相关系数。 （9）报告打印 点击“报告打印预览”，在报告打印预览画面 点击“打印”即可，如下图所示：;;7.4 供试品的检测过程 7.4.1 供试品溶液制备 根据干扰预试验结果，用血液保存液 调节液将供试品稀释到无干扰浓度，同时制备该浓度 的供试品阳性溶液和阳性标准品溶液，样品阳性溶液 外加内毒素标准品浓度和阳性标准品浓度相同，标准 品浓度为所选用标准曲线的中间浓度。 7.4.2 检测软件设置 （1）点击“新试验”，出现试验向导画面，首先填写鲎试剂批 号、内毒素批号、检查用水批号，点击“供试品设置”， 选择供试品名称，所做供试品管的稀释倍数；填写供试 品批号、稀释倍数平行管数。选中“回收率管” ，填写外 加内毒素浓度、供试品稀释组数、“供试品稀释组数”填 写“1”。点击自动设置，在表格中出现所设置数据。 ; （2）点击“阴阳性