血清白蛋白的分离与纯化蛋白定量测定课件.pptVIP

血清白蛋白的分离与纯化、蛋白定量测定 实验目的 掌握DEAE纤维素层析法分离纯化蛋白的方法 掌握考马斯亮兰法测定蛋白质的原理 DEAE纤维素层析法分离纯化白蛋白 离子交换层析基本原理 根据待分离物质带电性质不同的分离纯化方法 以离子交换剂为固定相，特定的离子溶液为流动相，依据各种离子或离子化合物与离子交换剂的结合力不同进行分离纯化的层析方式 离子交换剂 离子交换剂由基质、电荷基团（或称功能基团）和反离 子组成。基质一般是不溶性聚合物，如纤维素，交联葡聚糖， 交联琼脂糖等； 树脂 －O — N+(CH3)2 — OH- 纤维素－O — CH2— COO-— Na＋ 基质 电荷基团 反离子 阳离子交换剂 阴离子交换剂 人血清蛋白质的等电点及分子量 蛋白质 等电点 分子量 白蛋白 4.88 69000 α1-球蛋白 5.06 200000 α2-球蛋白 5.06 300000 β-球蛋白 5.12 9000-150000 γ-球蛋白 6.85-7.50 156000-300000 实验原理 除去硫酸铵后的白蛋白在0.02mol/L醋酸铵缓冲液（pH 6.5）条件下，加到DEAE纤维素柱上，此pH时， DEAE纤维素带正电荷。 改用0.06mol/L醋酸铵缓冲液（pH 6.5）后。在此pH与离子强度时，DEAE-纤维素带有