结核杆菌及其诊断PPT.pptVIP

* * 结核分枝杆菌及其临床诊断 郴州市第一人民医院医学检验中心 李胜涛 目录 1 结核分枝杆菌感染现状 2结核分枝杆菌生物特性、致病性及临床诊断 3 结核分枝杆菌检测方法及其应用 4本室目前结核分枝杆菌检测试剂情况分析 5病例分析 1 结核分枝杆菌感染现状 1 我国拥有近5.5亿的结核感染人群 2我国每年新发生肺结核患者100万例 3 结核病主要经呼吸道传播 4只要坚持正规治疗，绝大多数肺结核患者是可以治愈的 AIDS患者极易合并结核分枝杆菌感染 2 结核分枝杆菌生物特性与致病性 2.1生物特性 抵抗力强：尘埃上保持传染性8～10d，在干燥痰内可存活6～8个月，痰液可增强结核分枝杆菌的抵抗力。 变异性：可发生形态、菌落、毒力、免疫原性 易发生耐药性 ：MDR和XDR，每年有大约44 万例多药耐药型肺结核新患者出现，约15 万患者死于多药耐药型肺结核 2.2致病物质： 荚膜—亲和吞噬细胞，含有多种酶，能抑制溶酶体同吞噬体结合 该菌细胞壁脂质含量较高，约占干重的60% 索状因子—主要损伤细胞线粒体和抑制氧化磷酸 化过程，抑制粒细胞游走和引起肉芽肿 磷脂—能促进单核细胞增生，并使巨噬细胞转变 为类上皮细胞，从而形成肉芽肿 硫酸脑苷酯—能抑制溶酶体同吞噬体结合 蜡质D—可激发机体产生迟发超敏反应 蛋白质—可激发机体产生超敏反应 3 结核分枝杆菌检测方法及其应用 3.1染色检测结核分枝杆菌方法 抗酸染色法： 玻片法： 浓集法：夹层杯法 妻-尼染色法 荧光染色法 3.2 微生物检测结核分枝杆菌的方法 细菌培养 罗-琴氏培养基：2周-5周才能长出菌落 Bactec TB 460、BactecMGIT 960：20天 液体变色培养基：德国MB Redox 系统 噬菌体裂解试验：噬菌体D29 对缓慢生长的结核分枝杆菌有亲噬性 结核杆菌L 型：涂片其形态不易与其他细菌的L 型相区别，蚌埠医学院研制的结核杆菌L 型液体培养基使结核杆菌L 型生长迅速 3.3 免疫学方法检测结核分枝杆菌抗体 PPD 试验：结核菌素蛋白衍生物皮肤试验 L AM(脂阿拉伯甘露聚糖) 抗原：敏感74.5% 结核菌分泌性蛋白抗原：敏感性70.9% 纯化B C G( 卡介苗) 蛋白：敏感性80.0% PPD 抗原：敏感性83.6% 结核蛋白芯片：ESAT-6、CFP10、LAM、38KD和16KD 等 新的免疫检测技术 T SPOT TB 技术，QuantiFERON－TB 利用结核杆菌感染者外周血单核细胞中存在结核特异的活化T 淋巴细胞, 这些淋巴细胞在受到结核杆菌特异抗原刺激后分泌干扰素而设计的T细胞免疫斑点试验。 3.4结核分枝杆菌分子生物学诊断技术 巢式PCR： PCR-免疫层析法： 多重PCR: 定量PCR： 新的PCR技术应用于检测 SSCP：单链构象多态性分析，SSCP 用于结核杆菌基因的突变和耐药性的快速检测 PCR-RFLP 技术：PCR 和限制性内切酶相结合的技术，于鉴定分枝杆菌菌种，基因突变和耐药性检测 Gene Chips：检测结核杆菌、菌种鉴定、研究耐药基因以及基因组比较分析有灵敏快速、特异性高等特点。 纳米技术的应用 HSAM：杂交信号放大方法 利用Dynal 磁珠杂交分离靶基因省去了DNA 提取步骤，组装的纳米颗粒作为报告信号的结合载体，拥有数量巨大的亲和素位点，增加了报告信号( Biotin-FITC) 数量，放大了信号强度，提高了检测的灵敏度 *