朊病毒的发现与研究PPT.pptx

朊病毒的发现与研究一.朊病毒的定义 朊病毒又称蛋白质侵染因子、毒朊或感染性蛋白质，是一类能侵染动物并在宿主细胞内复制的小分子无免疫性疏水蛋白质。二.朊病毒引起的疾病18世纪 冰岛羊瘙痒病1920s H.Creutzfieldt A.Jacob人克雅氏病1950s 巴布亚-新几内亚（G.ajdusek） 库鲁病1980s英国 疯牛病 丹尼尔 ·伽杜塞克 （D.Gajdusek)由于查明库鲁病的病因，认为是一种潜伏期极长的进行性病毒获得1976年诺贝尔生理学或医学奖三.朊病毒的发现1997年，为肯定斯坦利·普鲁希纳在研究克雅氏病（Creutzfeldt-Jakob disease，CJD）病原体的过程中发现了朊蛋白（Prion），并在其致病机理的研究方面的贡献。授予其诺贝尔生理学或医学奖艰巨的研究历程普鲁西纳1972年遇见一列克雅氏病人，病人6星期后死去1974年普鲁西纳正式开始对羊搔痒病开始研究，1982年发表第一篇文章1975年起，普鲁西纳得到并用于研究的经费共5000多万美元普鲁西纳的研究工作 目标： 分离，纯化病原物，并加以鉴定，每步都离不开检测方法把瘙痒病从羊转至小鼠发病潜伏期3-5年4-5个月得到难以相信的实验结果 原来预期得到一种小型病毒 结果所有实验数据表明：病原物不是小型病毒，不含核酸，而是蛋白质粒子 经过八年的实验反复论证（1974-1982）发表第一篇文章: 提出羊瘙痒病病原物是一种蛋白质粒子 蛋白质类的感染颗粒（Proteinoceous Infectious Particle，Prion） 质疑？？？没有核酸，这个病原物如何增殖？如何复制本身的遗传信息 是不是存在核酸，只是未能检测出来随着研究深入，得到更多打破传统观念的结果（1）寻找Prn-p基因 编码朊蛋白的基因，不但在染病动物脑中存在，在正常动物脑中也有，而且表达的一样多 正常小鼠（PrPc) 得病小鼠（PrPsc）结论：PrPsc的出现可能不是调节基因起作用的（2）朊蛋白在正常动物脑中的功能是什么 剔除PrP基因的遗传工程小鼠，看不出病症，看起来一切正常，亦能正常生育（3）PrP%小鼠做出贡献 把染病小鼠的脑提取物接种给PrP%小鼠，不染病，接种给普通小鼠却染病 由此得出：PrPc蛋白的存在是染病的必要条件（4）PrPc蛋白的一些性质由208个氨基酸残基组成，分子量33-35kd（大小仅为最小病毒的1%）含有一对二硫键和2个N型复合糖链，二硫键和糖基化位点都在C端N端有22个氨基酸残基组成的信号肽序列C端有由23个氨基酸残基组成的糖基磷酸肌醇锚（GPI)受体结合位点。说明PrPc是一种膜结合糖蛋白（5）PrPc与PrPsc的一级结构都由同一基因编码，氨基酸序列完全相同两者并无共价修饰的区别利用傅里叶转换红外光谱对两者结构进行比较，发现两者的二级结构有很大区别PrPc和PrPsc的立体结构比较 PrPc： 有4个α-螺旋 极少 β折叠 PrPsc: 有2个α-螺旋 有4个β-折叠 （6）PrPc和PrPsc在高级结构上的差别，在细胞内蛋白质的行为和代谢特征上也反应出来 PrPc PrPsc胞内定位细胞表面 胞质内蛋白酶水解水解完全 局部水解（7）综合以上结果，提出理论假设： 羊瘙痒病的发生是因为PrPsc的入侵，把脑细胞中原来就有的PrPc“带坏”，使正常的PrPc重新折叠，形成新的高级结构PrPsc 增多的PrPsc形成淀粉样沉淀，造成脑细胞破坏，形成空斑四.朊病毒的感染，预防以及治疗 人或动物感染PrPsc ↓ 由淋巴细胞进入中枢神经系统或直接 进入中枢神经系统 ↓ 与神经元表面正常的PrPc作用 ↓ PrPc → PrPsc→导致神经元细胞凋亡裂解 人类朊蛋白病的起病方式有散发行，遗传性，传染性等。80%的病例不是传染的结果，而是散发的，有或者没有遗传易感性。 抗性抵抗蛋白酶K的消化作用标准的高压蒸汽灭菌（121.3℃，20min），不能破坏朊病毒，需要高压蒸汽灭菌134℃，≥2h，才能使其失去传染性对辐射，紫外线，及常用消毒剂有很强抗性预防消灭已知的感染牲口，对病人进行适当的隔离加强肉品检验，不许病牛羊肉上市，禁止其产品与人接触禁止使用污染的食物，对神经外科的操作及器械进行消毒要严格规范化，对角膜及硬脑膜的移植要排除供者患病的可能对有家庭型疾病的家属更应注意防止其接触该病治疗化学治疗特异性抗体治疗：单克隆抗体免疫被动疗法RNA干扰免疫治疗五，朊病毒的研究进展发现朊蛋白变形产生毒性的原因：毒性开关假说朊蛋白的致病机理：两种观点（1）PrPC正常功能的缺失；（2）P