河北师大微生物实验一PPT.ppt

微生物实验概述 一、微生物实验的目的和意义 1.掌握微生物学最基本的操作技能； 2.通过实验学习和了解微生物学的基本知识； 3.加深对理论知识的理解和掌握； 4.通过实验有意识培养自己的综合能力。 二、微生物实验课的要求 1.课前预习； 2.及时记录； 3.保持安静和整洁； 4.注意安全:自身安全，实验室安全，实验要规范； 5.实验完成注意实验室用品清洗及实验室卫生。 三、微生物学实验的内容 实验一：环境及人体微生物的检测（3学时） 实验二：细菌的单染色和革兰氏染色（3学时） 实验三：霉菌的形态观察（3学时） 实验四：酵母菌形态观察、死活鉴定、计数和大小 测定（3学时） 实验五：从土壤中分离纯化放线菌（6学时） 实验六：细菌鉴定中常用的生化反应试验（6学时） 实验七：环境中纤维素降解菌的筛选和初步鉴定 （设计性实验 6学时） 实验室环境及人体表面微生物的检查 实验一 一、 实验目的 证明实验室环境与体表存在微生物； 比较不同环境下细菌的数量和类型； 观察不同微生物的菌落形态特征； 体会无菌操作的重要性。 二、实验原理 1.培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖的营养基质。 2.高压蒸汽灭菌法可杀死芽孢在内的所有微生物，是灭菌效果最好、应用最广泛的灭菌方法。将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽，从而增加灭菌器内的压力，使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 3.琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶状物质，是应用最广泛的凝固剂，98～100℃融化，45℃以下凝固。 4.菌落：单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部（厌氧型）生长繁殖到一定程度，形成肉眼可见有一定形态的子细胞群落。各种微生物的菌落特征是衡量菌种纯度、辩认和鉴定菌种的重要依据。 三、实验材料 试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂。 仪器及用具：灭菌锅、超净工作台、培养皿、培养箱等。 四、 实验步骤 1.培养基配制和分装 培养基配方： 牛肉膏3g， 蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂 20g，水（自来水）1000mL，调pH 7.0-7.2. 称量药品:根据培养基配方计算用量，称好后放入烧杯； 溶解:先加少量水溶解； 调节pH:用HCl，NaOH，不同微生物有不同pH值； 溶化琼脂:固体或半固体培养基必须加入一定量琼脂。注意此次实验先将琼脂称量到三角瓶中); 分装: 包扎标记 培养基名称，姓名，日期等。 2.包平皿 5个一包 。 3.灭菌 灭菌锅的使用： 开电源； 看水位(根据水位添加蒸馏水); 旋紧盖子； 设置温度时间,温度121℃，时间20min ； 打开排气阀； 当有白色蒸汽冒出时，关紧上排气阀，关小下排气阀，赶走灭菌锅内的空气； 保压灭菌； 降压为零，开盖，取物品。 4.无菌倒平板,体积大约平皿体积的一半（20-30mL），每组倒8个平板。 5.冷却后，在反面写标签（检测内容、日期、班级、姓名或学号） 6.微生物检测 空气中微生物（打开平板放置30 min；无菌操作台放置30 min）； 人体表面 a. 手指（洗前洗后）；b. 头发；c. 咳嗽。 7. 培养 37℃倒置培养1~2天，4℃冷藏。 8.观察菌落形态 细菌、霉菌和放线菌的菌落区别。 五、实验结果 1.计数 2.菌落特征描述（列表：厚薄，大小，表面，干湿形 状，颜色，透明度等） 六、思考问题 1.培养基配好后为什么要立即灭菌？如何检查是否无菌？ 2.灭菌之前为何要开上排气阀？ 3.灭菌以杀死何种微生物为标准？